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跑Buffer时出峰是怎么回事

  • 黄金天才
    2013/04/21
  • 私聊

毛细管电泳(CE)

  • Buffer配制方法是 0.5M的硼酸 + 0.025M HP-β-CD + 0.8g/L PEO,用氢氧化铯调PH9.10 用于分离乳清。

    电泳条件是压力进样0.5PSI,5S,工作电压14KV,电流约65uA,电泳时间30min。

    但是单独跑Buffer测试的时候,经常出峰而且出峰时间不固定。电泳前10min电流较稳定,但20min之后,电流开始陡然下降并不稳定,会从65uA急剧下降到10多uA,然后电流波动剧烈。

    毛细管是新换的,用别人的现成缓冲液跑他们的样品的时候,重现效果很好,毛细管活化应该没有问题。
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  • beyond1977

    第1楼2013/04/22

    应助达人

    问题好像没说很清楚,你用自己的缓冲液跑样品怎么样?还有别人的缓冲液和你的是一样的吗?

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  • nini2006

    第2楼2013/04/22

    "用别人的现成缓冲液跑他们的样品的时候,重现效果很好"。说明是你缓冲体系的问题。电流不稳定和出峰时间不一致更说明了这一点。buffer有峰很正常,很多时候光进水会有峰呢。
    从你的缓冲溶液的添加剂里面找原因吧。很多时候,buffer要新鲜配制,久置会变质。

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  • ericwong

    第3楼2013/04/23

    Buffer的配方一样,不过不同的人配制出来的,经常会有不同

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  • 黄金天才

    第4楼2013/04/23

    我们现在也怀疑是buffe的问题。今天我们也光进水跑了几次。发现也出了峰。后来发现时因为冲水和进行压力分离的时候,针管离开了水面。再进入水面然后进行分离,后来优化了一下程序。在进行压力分离之前,先用分离的水进行冲洗,避免气泡混入。然后在针管不离开水面的情况下,再进行压力分离,就检测不出没有峰了。

    现在想想可能是缓冲液,所以明天准备重新配置一次看看效果

    nini2006(nini2006) 发表:"用别人的现成缓冲液跑他们的样品的时候,重现效果很好"。说明是你缓冲体系的问题。电流不稳定和出峰时间不一致更说明了这一点。buffer有峰很正常,很多时候光进水会有峰呢。
    从你的缓冲溶液的添加剂里面找原因吧。很多时候,buffer要新鲜配制,久置会变质。

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  • nini2006

    第5楼2013/04/24

    加油咯,祝你好运~

    黄金天才(v2704726) 发表:我们现在也怀疑是buffe的问题。今天我们也光进水跑了几次。发现也出了峰。后来发现时因为冲水和进行压力分离的时候,针管离开了水面。再进入水面然后进行分离,后来优化了一下程序。在进行压力分离之前,先用分离的水进行冲洗,避免气泡混入。然后在针管不离开水面的情况下,再进行压力分离,就检测不出没有峰了。

    现在想想可能是缓冲液,所以明天准备重新配置一次看看效果

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  • ericwong

    第6楼2013/04/25

    重新配制了缓冲液,效果如何了呢?

    黄金天才(v2704726) 发表:我们现在也怀疑是buffe的问题。今天我们也光进水跑了几次。发现也出了峰。后来发现时因为冲水和进行压力分离的时候,针管离开了水面。再进入水面然后进行分离,后来优化了一下程序。在进行压力分离之前,先用分离的水进行冲洗,避免气泡混入。然后在针管不离开水面的情况下,再进行压力分离,就检测不出没有峰了。

    现在想想可能是缓冲液,所以明天准备重新配置一次看看效果

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  • xiaoxin2809

    第7楼2013/04/25

    我曾经遇到电流不稳的问题,最后排查出是buffer的原因,其实不是buffer本身,而是由于配制溶液的容器的问题,没洗干净

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  • nini2006

    第8楼2013/04/25

    很同意你的说法。我们常常把异常出现的可能原因想得很复杂,其实很多时候往往只是在考我们的基础操作而已,每个细节都是不容忽视的。

    xiaoxin2809(xiaoxin2809) 发表:我曾经遇到电流不稳的问题,最后排查出是buffer的原因,其实不是buffer本身,而是由于配制溶液的容器的问题,没洗干净

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