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气质连用中,内标物计算其他物质含量,与内标物的进样量有没有关系?

气质联用(GCMS)

  • 我测定元宝枫和雪松的挥发物成分及含量

    选用3-壬酮,浓度为原液(99%,密度0.82),稀释100倍后,不合适,在稀释液基础上又稀释2倍,这样浓度应该是4.1mg/ml吧。

    元宝枫进样2ul,出峰较好,相对含量在5%左右;雪松在5ul,出峰较好,相对含量7%。

    根据内标物计算成分公式:

    含量mg/g=(组分峰面积/内标物峰面积)*(内标质量mg/样品量g)

    我理解的内标物质量mg,是进样量*浓度

    样品量g,是我选择的样品的质量数(叶片1og).

    如果这样理解的话,内标物的进样量不是很有关系吗?但是我如果用4.1mg/ml浓度在元宝枫中进样5ul的话,内标物占的比例很大35%左右,如果这样计算的话,与2ul的差别是数量级上的。

    我的上述理解对吗?现在很迷惑。查的资料用的浓度基本在0.41mg/ml的数量上。所以我很迷惑,如果我用4.1的进样2ul合理吗?看了很大资料,发现非化学的专业的,好像很多内标物浓度及计算都不怎么靠谱。

    如果我认为内标物不准确的话,我直接用峰面积和相对含量对各组分进行比较,应该也是可行的吧?

    谢谢!
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  • 荆棘鸟之歌

    第1楼2013/05/22

    内标法 就是内标物的质量是已知的,不是进样量*浓度,你样品前处理加多少体积浓度的内标,你自己可以计算的,所以要加准确了,不管标线中还是样品中,至于后面前处理中定容不准确,或者损失什么的不用担心,进样量也不会影响定量的。去掉内标物,你也可以直接用外标法进行定量。

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  • hyf271

    第2楼2013/05/22

    一般仪器分析都要先做标准曲线,假设过原点那公式为y=ax。1)外标法:计算y直接为各标样浓度的强度或者峰面积;x则为标样浓度,进一步可以推导出a斜率。测试未知浓度的样品时就可以根据仪器的响应强度或面积带入该公式算出样品溶液浓度。

    2)内标法:y是标准物质响应面积/内标物响应面积(A/Ais),x为标准物质浓度比上内标物质浓度(C/Cis),去建立曲线,而后得出斜率a。公式变为A/Ais=a(C/Cis)。用内标法测试一个未知物时C0不知道要求,仪器可以告诉A0带入公式C0=(A0/Ais)*Cis*a。下面的计算就跟外标法一样,根据溶液中样品浓度C0、定量体积v0、称量质量m0、稀释倍数d去计算原始样品的浓度C=(C0V0)/m0*d

    内标法一般是样品加的浓度与标准曲线中内部物质的浓度一致。万一干扰过大你加大进样量或者内标浓度,从上面公式可以看出它们的响应强度也会正比例变化。不过现在都用仪器软件算,你有变动可能要用手动去计算。

    也不是所有测试过程用内标都波动大或者不准,多环芳香烃PAHs用的内标是氘带物,内标物与被测物性质很相似、方法里面要求某个氘带物内标只能监控哪些物质,这样就严格很多、方法的回收率稳定性都很好。

    上面是我的愚见,如有不当还多指正。

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  • songxh77

    第3楼2013/05/22

    谢谢,基本上没看懂,哈。

    我们非化学专业的好像就是弄不明白怎么回事啊。

    实验结束后找个化学老师好好咨询下。

    谢谢大家!

    我的担心是去掉内标物后,我测定的物质的成分是可以要的,如果但看峰面积和相对含量的话(面积归一法)

    hyf271(hyf271) 发表:一般仪器分析都要先做标准曲线,假设过原点那公式为y=ax。1)外标法:计算y直接为各标样浓度的强度或者峰面积;x则为标样浓度,进一步可以推导出a斜率。测试未知浓度的样品时就可以根据仪器的响应强度或面积带入该公式算出样品溶液浓度。

    2)内标法:y是标准物质响应面积/内标物响应面积(A/Ais),x为标准物质浓度比上内标物质浓度(C/Cis),去建立曲线,而后得出斜率a。公式变为A/Ais=a(C/Cis)。用内标法测试一个未知物时C0不知道要求,仪器可以告诉A0带入公式C0=(A0/Ais)*Cis*a。下面的计算就跟外标法一样,根据溶液中样品浓度C0、定量体积v0、称量质量m0、稀释倍数d去计算原始样品的浓度C=(C0V0)/m0*d

    内标法一般是样品加的浓度与标准曲线中内部物质的浓度一致。万一干扰过大你加大进样量或者内标浓度,从上面公式可以看出它们的响应强度也会正比例变化。不过现在都用仪器软件算,你有变动可能要用手动去计算。

    也不是所有测试过程用内标都波动大或者不准,多环芳香烃PAHs用的内标是氘带物,内标物与被测物性质很相似、方法里面要求某个氘带物内标只能监控哪些物质,这样就严格很多、方法的回收率稳定性都很好。

    上面是我的愚见,如有不当还多指正。

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  • 千层峰

    第4楼2013/05/22

    这两年你做都了很多植物挥发物的实验啦,论文都发几篇了吧。

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  • songxh77

    第5楼2013/05/23

    呵呵,你还记得啊,刚好一年了。树木挥发物测定存在的问题有两个:

    问题1,采样问题,我采用的是SPME-GC-MS,摘叶测定,主要是仪器问题,专家审稿认为应该活体采样。活体采样常用的方法是在树上直接采样,采用吸附管(内填吸附剂),采样后热脱附TCT,然后是GC/MS,但是我们学校没有响应热脱附设备,所以这是硬伤;

    问题2,测定时没有加入内标物,没有做回收率实验,所以这次补充内标物实验,但是我的实验和查阅的相类似的资料,因为内标物的问题,到现在不是很明白。但是有点我确信,有的资料是错的(指的是农业类的测定方面的,我查到的部分资料有错误,看不到离子流图,推测下内标物相对含量最高在3%-6%之间,如果没有其他未检出成分的话,如果这样的话,也是可以的。也没有说明由内标含量怎样推测出其他组分含量。)

    没有做回收率实验,是因为还不太明白,而且标准品太贵了,我得买5种标准品,如果就用这一次,太浪费了。当然如果论坛有实验室友情卖出少量试剂的话,我很乐意的。哈。

    我做的是季节变化,和其他生理指标的相关分析,所以季节上很注意时间一致性。

    论文情况,写了2篇,很惭愧,1篇发在本校学报上(排到年末了,方法讨论方面的,价值一般)。另一篇很想投个好点的,但是由于上述两个问题,拒搞了,之后就很难再发了。

    我想请教:去年做的没有加内标物,做了3个季节的日变化,我想如果用峰面积来对相同组分进行分析的话,到底有没有意义。假设物质A,在3个季节的峰面积是这样的50000(日均值),20000,和15000,我能说该组分在3个季节的释放量呈下降趋势吗?写好的论文是采用相对含量分析的,总挥发物采用总峰面积进行比较的。

    你可能会问,既然这样为什么还要做呢?回答是,既然做了就尽力做好吧。如果有好的建议,我可以把论文发给您,帮我看看。对于寄希望的论文,我现在就是活马当死马医了。哈

    谢谢!

    千层峰(jxyan) 发表:这两年你做都了很多植物挥发物的实验啦,论文都发几篇了吧。

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  • 蓝是那么的天

    第6楼2013/05/23

    应助达人

    只要保证每个样品和标液中的内标量一致即可。

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