前言：目前, 双酚A的环境污染状况和分析方法的报道已经很多。水中双酚A 含量较低,合适的前处理技术是使其达到可检测水平的必经途径。固相萃取(SPE) 由于其操作简便、回收率高等特点,已成为环境样品前处理的常用方法,尤其适用于水中痕量有机污染物的富集。不同的仪器gcMS,HPLC,LCMSMS测定环境水中双酚A，其中gcMS需要进行衍生处理。HPLC,LCMSMS则不需要。因为反相柱不适合用丙酮进样，HPLC需以水进样；而LCMSMS需要以甲醇进样。
2试剂和材料：
① 双酚A
CAS：80-05-7
② 衍生化试剂
中文名称：N-甲基-N-(三甲基甲硅烷基)-2,2,2-三氟代乙酰胺英文名称：2,2,2-trifluoro-N-methyl-N-(trimethylsilyl)-Acetamide
简称：MSTFA
CAS：24589-78-4
分子式：C6H12F3NOSi
分子质量：199.25
沸点：130-132℃
③ 苯乙烯/二乙烯苯聚合物固相萃取小柱（500mg/6ml）
④ 其他：盐酸，丙酮，水，甲醇，乙腈，醋酸铵等
3 采样和样品保存
1L棕色试剂瓶采集1L水样，加入80mg的硫代硫酸钠，去除余氯。用盐酸调节pH为2±0.2，于4℃冰箱中保存。尽快分析，保存时间最多不超过两周。
4用gcMS测定时标准曲线的配制
以下是用gcMS测定时标液的配置及衍生化处理。如采用HPLCorLCMSMS测定时，则不需要衍生，直接以水配置，或者甲醇配置即可！
①称10mg双酚A于100ml的容量瓶中，用丙酮定容至刻度，配成浓度为100ug/ml的标准储备液，于4℃冰箱中保存.
②取1ml标准储备液于100ml容量瓶中，配制成1ng/ul的标准工作溶液。
③分别取200uL丙酮于安捷伦小瓶中，分别用微量注射针抽出10ul，20 ul，40 ul，60 ul，80 ul，100 ul，弃去。再用微量注射针抽取10ul，20 ul，40 ul，60 ul，80 ul，100 ul标准工作溶液于各自的瓶中，加入25ul的MSTFA，轻轻振动，静止，反应1min，上机测试。
5 gc-MS测试实验步骤：
以下是用gc-MS测试的实验步骤，若以HPLC上机，则以水活化，以LCMSMS上机，则以甲醇活化，不需要衍生处理。
①活化：
a 分别用10ml的丙酮洗柱两次
b 用37%的盐酸酸化过的水（pH=2）10ml活化柱子，不能将水抽干。
②固相萃取：
a 活化后立即固相萃取
b 干净的水，取1L进行萃取。废水和比较浑浊的水取100ml，进行萃取。流速：5 ml/min and 10 ml/min.
c 用10ml水冲洗，抽干，该水用盐酸酸化至pH=2.
d 用氮气吹干，500ml/min，吹1h。可通过吸附剂的颜色判断，湿的吸附剂为棕色，干的吸附剂呈淡淡的橙色。
③洗脱
a 加1ml丙酮于干燥的柱子中，平衡10min后洗脱
b 分别用1ml丙酮洗脱5次，每次洗脱均不能抽干，收集所有洗脱液
c 将试管置于氮吹仪上吹干，加入200ul的丙酮，以备衍生。
④衍生
加入25ulMSTFA于试管中，轻轻地混合均匀，反应1min，定容，转移至安捷伦小瓶中以备分析。
⑤ 上机测试
gc-MS测试
注意：活化柱子后应立即开始样品的固相萃取。必须保证填料床上无气泡。整个样品萃取过程，必须保证填料浸没于水中，不能抽干。柱内液面高于填料上边缘2cm为宜。
6仪器方法
A. gcMS
色谱柱：DB-5 MS(30m×0.25mm×0.25μm)
升温程序：初始温度60℃，保持1min，以10℃/min升温到280℃，保持时间7min。
进样口温度：250℃
分流方式：不分流
柱流量：1mL/min
MS条件：
离子源温度：230℃
接口温度：250℃
离子扫描范围：100～450m/z
溶剂延迟时间：5min
SIM：357，358，372
B. HPLC
仪器：高效液相色谱（HPLC）色谱柱：C18柱，5μm，4.6mmID*250mm
流速：1ml/min 进样体积：40μl
检测器：DAD：274nm 流动相：A：水、 B：乙腈，
梯度：
Time (min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 50 | 50 |
10 | 60 | 40 |
15 | 60 | 40 |
16 | 50 | 50 |
C. LCMSMS
仪器：Waters公司的Acquity TQD UPLC串联四极杆检测器（LC-MS-MS）
流动相：A相甲醇 B相2mmol醋酸铵水溶液
洗脱程序：
Time(min) | Flow(mL/min) | A(%) | B(%) |
Initial | 0.3 | 70 | 30 |
1 | 0.3 | 40 | 60 |
2 | 0.3 | 40 | 60 |
3 | 0.3 | 70 | 30 |
液相色谱柱：C18, 1.7μm 2.1×50mm
色谱柱温度：40°C
检测模式：MRM(Multi Reaction Monitor,多反应监测)
通道（Channel） | 母离子m/z | 子离子m/z | 锥孔电压(V) | 碰撞电压(V) |
1 | 227 | 212 | 20 | 15 |
2 | 227 | 133 | 20 | 10 |
离子化模式：ES+
特征离子及相应参数
质谱运行时间：4min
去溶剂气流速：650L/hr
去溶剂气温度：350℃
碰撞气流速：50L/hr
离子源温度：110℃
应助达人
迎国庆送壕礼！十月发帖抢大疆云台
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
喜迎国庆！第十七届原创大赛超级原创日参赛奖励翻倍
丹纳赫四十周年寄语征集领大礼包
