【第六届原创】动物源食品中多兽药残留筛选方法研究

2．仪器设备

液相色谱—质谱仪（LC-MS-MS）Thermo TSQ,ESI源

电子天平（美国奥豪斯）、旋转蒸发仪（瑞士Buchi）、冷冻离心机（德国贝克曼）、研磨仪（德国莱驰）、超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、棒状均质器（IKA T18）、涡旋混合器（IKA）。

3．试剂。

乙腈：德国默克，色谱纯；

水：1.25L哇哈哈纯净水（杭州产）；

甲醇：德国默克，色谱纯

甲酸：色谱纯

正己烷：Honeywell， 色谱纯

兽药标准品（购置于DR公司,纯度>90%）

4．试验溶液制备方法

方法一：基质简单样品

称取5.00g样品，加入20 mL含0.1%乙腈+甲醇（95+5），1g硅藻土，5g无水硫酸钠， 高速均质2min，以毎分钟4,000转离心分离5分钟，收集有机层。再次加入20 mL含0.1%乙腈+甲醇（95+5）重复提取一次，收集并合并有机层。加入10ml乙腈饱和正己烷，震荡均匀后，出去正己烷层。加入5 mL正丙醇，40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入1.0 mL乙腈：水（4：6）混合溶液溶解，以毎分钟15,000转冷冻离心10min，上清液经微孔滤膜过滤，上机检测。

方法二：基质复杂样品

（考虑到对液相分离色谱柱的保护，除杂效果好些，先过C18固相萃取柱）

称取5.00g样品，加入20 mL含0.1%乙腈+甲醇（95+5），1g硅胶土，5g无水硫酸钠， 高速均质2min，以毎分钟4,000转离心分离5分钟，静置分层。

将C18柱放入固定架中，先加入5M乙腈预洗柱，下接鸡心瓶，移入上述提取液10ml，先后用10ml甲醇和乙酸乙酯洗涤柱，收集的提取液和洗涤液。加入10ml乙腈饱和正己烷，震荡均匀后，出去正己烷层。加入3 mL正丙醇，40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入1.0 mL乙腈：水（4：6）混合溶液溶解，以毎分钟15,000转冷冻离心10min，上清液经微孔滤膜过滤，上机检测。

5．制作标准曲线

各兽药等的标准品分别配成甲醇溶液，再配制成含各兽药等在适当浓度范围的数个乙腈：水（4：6）混合溶液。

6．测定条件

柱：C18柱（十八烷基甲硅烷基化硅胶）（粒径3.5μm），内径2.1 mm、长100 mm

柱温：40℃

流动相：甲醇与0.1%甲酸水梯度，流速250μl/min

7：讨论

7.1：本试验方法只能分析部分兽药残留的定性筛选，对于定量检测最建议使用个别检测方法，特别是对于多兽残检测的一齐分析，会造成回收率和灵敏度的差异。

7.2：本实验先后采用不同的提取液进行比较（比较了乙腈、80乙腈+20甲醇、60乙腈+20甲醇+20乙酸乙酯、0.1%甲酸乙腈、0.1%甲酸的95乙腈+5甲醇、0.1%甲酸的95乙腈+5乙酸乙酯），结果发现以0.1%乙腈+甲醇（95+5）的提取效果为最好，对于多兽残回收的种类较多。

7.3：同时使用C18、硅胶柱固相萃取和不进行固相萃取进行比较，发现硅胶柱效果不好，C18与不进行固相萃取，差异不大。考虑到液相色谱柱使用C18色谱柱，复杂基质的前处理使用C18固相萃取，对于保护色谱柱会更好。

7.4：对基质加标和标样进行比较，发现有些农药的基质效应明显，会造成回收率的很大差异。

7.5：这个实验加标浓度仅仅做了0.01mg/kg、0.02mg/kg两种，检测精度还需要进一步的确证。

7.6 对于该实验进行了99种兽药残留的试验，由于不同药物的性质差异较大，通过试验发现60多种的兽药残留利用该方法的回收率在40%以上。

7.7 对于兽药多残留还在进一步的试验阶段，欢迎各位好友提出宝贵的意见，以便加快兽药多残留检测方法的进一步完善。

7.8 由于兽药种类较多，扫描离子较多，会造成峰型较宽，灵敏度下降，为了避免这个现象，分3针进行，通过分段扫描，正离子分成2个仪器方法，负离子一个方法。

7.9 由于兽药种类较多，试图采取内标法定量，但并不是所有的药物都有内标，同时增加扫描离子，进一步的影响峰型和灵敏度，操作起来比较繁琐，效果并不太好。

7.10 对于走过试验的一点小结，希望各位老师进行指导，尽快进行方法的完善，提出宝贵意见。

8：附录：

部分兽药的离子表

部分总粒子流图

部分兽药的质谱色谱图