【许愿原创】流动相和分离度的关系【houjjun推荐】

流动相和分离度的关系

流动相在液相色谱中是非常重要的，它在很多情况下是可以决定实验的成败或实验效果的好坏。流动相的问题一般包括流动相的成分和各成分的比例。今天我们就来说说流动相各成分的比例对保留时间和分离度的影响。结合防腐剂苯甲酸、山梨酸测定的实验来简单的介绍下。

实验与分析过程

仪器与试剂

仪器：

高效液相色谱仪（紫外检测器）

试剂:

1. 甲醇（色谱纯）

2. 乙酸铵（分析纯）

3. 苯甲酸标准储备液

4. 山梨酸标准储备液

5. 糖精钠标准储备液

6. 超纯水。

色谱条件

色谱柱：Venusil XBP C18（4.6mmX250mm，5μm）

V9520525CK0043

波长：230nm

流速：1.0mL/min

进样量：10μL

柱温：室温。

流动相为0.02mol/L乙酸铵：甲醇=95+5（V：V）时的色谱图：

苯甲酸保留时间是8.77min，山梨酸保留时间是11.53min，分离度是4.64。

流动相为0.02mol/L乙酸铵：甲醇=90+10（V：V）时的色谱图：

苯甲酸保留时间是7.82min，山梨酸保留时间是9.85min，分离度是3.55。

流动相为0.02mol/L乙酸铵：甲醇=85+15（V：V）时的色谱图：

苯甲酸保留时间是5.63min，山梨酸保留时间是7.08min，分离度是2.92。

从以上对比可以看出，在该实验中（对于反相高效液相色谱法检测的很多样品都有这个规律）有机相甲醇的比例越高，样品的保留时间越短，分离度越差。从色谱图也可以看出，甲醇比例高了，样品的峰高也相应的高了一些，峰变窄了一些，通过计算峰面积略小了一些。这样对于方法的检出限会更好些，但如果会受到分离度的影响，这就得不偿失了。所以根据不同的样品，不同的现实情况选择最理想的方法，效果是最佳的。

结论

该色谱条件检测苯甲酸、山梨酸准确、可靠。但如果样品中干扰物较多，尤其是在样品峰附近的，可能由于样品与干扰物分离度差从而影响到检测效果，所以针对以上情况，流动相选择0.02mol/L乙酸铵：甲醇=95+5（V：V）检测结果更为准确、可靠。如果样品中干扰物和样品完全分离，不会影响检测结果时流动相选择流动相为0.02mol/L乙酸铵：甲醇=85+15（V：V），检测时间更短，峰更窄、更高，效果更好。当然如果干扰物足够少，不影响检测结果，甲醇的比例还可以再大些，只要这两个样品能完全分离就行，这样综合考虑效果最好。

当然这种方法在每种具体样品分析时要多次实验才能确定，对照品和供试品的测试一定要在同一条件下，否则实验是不准确的，是检测所不允许的。如果对样品的分离度没有把握，没时间做这些工作，或不愿意做这些，为了确保检测结果的准确、可靠还是选择第一种流动相更为合理。