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顾此失彼，山重水复总无路，奈若何？——记一次色谱条件改进

逆天一棍

2013/10/26
光谱

前面有个帖子提及，工作中要检测某制剂中苯甲醇和苯甲酸苄酯的含量。但是试了一个方法，感觉还行，就初步把这个方法定了下来（详见：WEL-PEG20M再次出手，依然手到擒来！http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130731/4880606/）。但是等到该项目正式立项，需要对方法进行方法学验证的时候，才发现有问题——虽然苯甲醇和苯甲酸苄酯的分离及准确性没有问题，但是制剂中因为有其他的辅料存在，在当初的色谱条件中保留时间非常长，以至于影响到后面色谱图的采集（详见：一次前期认识不足造成的色谱条件改进http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20131025/5027739/）

这里，就把发现问题，解决问题的思路及实践和大家共享一下。

当时发现问题后，首先想到的是通过调节柱流速以及升高柱温，加快强极性目标物的洗脱速度。

尝试的结果，柱流速调整到3mi/min，柱温为225℃，保留时间仍然很长，在100分钟后才开始出峰，实际的出峰时间是从100min~105min。

这么高的温度（色谱柱上限为240℃），一针要做2个小时，才能把这一针走干净，不说色谱柱能不能受得了，实验人员都受不了哇！

一个保留时间在2min（苯甲醇），极性比较弱，一个在105min，极性超强！这极性的差距，还真不是盖的！

没办法，只能更换色谱柱试试了。

考虑到极性的差距，只能选择中等极性的色谱柱，以期两种物质的保留时间能折衷一下。

但是装机的时候，随机带了有3跟色谱柱，分别是HP-5，DB-624以及DB-WAX。因为项目的开展，而且项目之间有污染，各色谱柱已经分配到各项目了。这个时候，只能去求人家，拿来试试方法。

用DB-624做的升温230℃，采集60min仍然没有出来，最后是在72min左右出的峰！

保留时间在72min，而且温度还是230℃，离其上限温度260℃已经非常近了，估计再升高温度，保留时间不会改变太多了！就没有试苯甲醇的保留时间，直接换HP-5色谱柱。

这次，该物质倒是很顺畅的出峰了：

保留时间是行了，但是峰型很烂，而且塔板数才有2000多。

更何况，这个物质出峰了，可苯甲醇却又找不到踪影了。

最后采集了90min，都没有找到苯甲醇的踪影！

用DB-WAX的柱子做，和月旭的柱子没有二致。

也就是说，该两种物质，顾此失彼，顾彼失此，犹如鱼和熊掌，不能兼得！山重水复，却总无路可通！

最终的方案是：选择月旭的色谱柱，又优化了程序升温的方法，把一针的采集时间控制在20min内，因为后面的强极性物质保留时间比较久，峰展宽效应很明显，峰高很小，为一馒头峰，与苯甲醇和苯甲酸苄酯的峰高相比，完全可以忽略。最终就无视其的存在。

这是最终方案做出来的色谱图：

精
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相关话题

wsy18

第1楼2013/10/27

升温方法是怎么优化的呢？

0

zhw19811005

第2楼2013/10/27

发现问题之后，最重要的是有清晰的思路

0

精
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wsy18

第3楼2013/10/28

思路要以经验来支撑。
zhw19811005(zhw19811005) 发表:发现问题之后，最重要的是有清晰的思路

0

给力

第4楼2013/10/28

我也想问升温怎么优化的，冒似只更换了色谱柱
wsy18(wsy18) 发表:升温方法是怎么优化的呢？

0

精
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wulin321

第5楼2013/10/28

应助达人

优化控制升温的方法？

0

精
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逆天一棍

第6楼2013/10/28

根据目标物的保留时间，通过调整柱流速和温度来进行保留时间的优化。
wsy18(wsy18) 发表:升温方法是怎么优化的呢？

0

逆天一棍

第7楼2013/10/28

发现问题，分析问题，提出解决问题的方案，用实践验证方案的可行性。
zhw19811005(zhw19811005) 发表:发现问题之后，最重要的是有清晰的思路

0

逆天一棍

第8楼2013/10/28

说的都很对。
wsy18(wsy18) 发表:思路要以经验来支撑。

0

逆天一棍

第9楼2013/10/28

其实就是对柱流速及色谱柱的温度进行调整，看能否让保留时间提前。因为强保留物质保留时间提前的效率不高（这一块做的多而且碎，就没有贴图，一笔带过了），所以后来进行了色谱柱的更换。
给力(huojuncai) 发表:我也想问升温怎么优化的，冒似只更换了色谱柱

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逆天一棍

第10楼2013/10/28

是的，包括调节柱流速。
wulin321(wulin321) 发表:优化控制升温的方法？

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