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顾此失彼,山重水复总无路,奈若何?——记一次色谱条件改进

  • 逆天一棍
    2013/10/26
    光谱
  • 私聊

厂商论坛

  • 前面有个帖子提及,工作中要检测某制剂中苯甲醇和苯甲酸苄酯的含量。但是试了一个方法,感觉还行,就初步把这个方法定了下来(详见:WEL-PEG20M再次出手,依然手到擒来!http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130731/4880606/)。但是等到该项目正式立项,需要对方法进行方法学验证的时候,才发现有问题——虽然苯甲醇和苯甲酸苄酯的分离及准确性没有问题,但是制剂中因为有其他的辅料存在,在当初的色谱条件中保留时间非常长,以至于影响到后面色谱图的采集(详见:一次前期认识不足造成的色谱条件改进http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20131025/5027739/

    这里,就把发现问题,解决问题的思路及实践和大家共享一下。

    当时发现问题后,首先想到的是通过调节柱流速以及升高柱温,加快强极性目标物的洗脱速度。

    尝试的结果,柱流速调整到3mi/min,柱温为225℃,保留时间仍然很长,在100分钟后才开始出峰,实际的出峰时间是从100min~105min。





    这么高的温度(色谱柱上限为240℃),一针要做2个小时,才能把这一针走干净,不说色谱柱能不能受得了,实验人员都受不了哇!

    一个保留时间在2min(苯甲醇),极性比较弱,一个在105min,极性超强!这极性的差距,还真不是盖的!

    没办法,只能更换色谱柱试试了。

    考虑到极性的差距,只能选择中等极性的色谱柱,以期两种物质的保留时间能折衷一下。

    但是装机的时候,随机带了有3跟色谱柱,分别是HP-5,DB-624以及DB-WAX。因为项目的开展,而且项目之间有污染,各色谱柱已经分配到各项目了。这个时候,只能去求人家,拿来试试方法。

    用DB-624做的升温230℃,采集60min仍然没有出来,最后是在72min左右出的峰!



    保留时间在72min,而且温度还是230℃,离其上限温度260℃已经非常近了,估计再升高温度,保留时间不会改变太多了!就没有试苯甲醇的保留时间,直接换HP-5色谱柱。

    这次,该物质倒是很顺畅的出峰了:



    保留时间是行了,但是峰型很烂,而且塔板数才有2000多。

    更何况,这个物质出峰了,可苯甲醇却又找不到踪影了。



    最后采集了90min,都没有找到苯甲醇的踪影!

    用DB-WAX的柱子做,和月旭的柱子没有二致。

    也就是说,该两种物质,顾此失彼,顾彼失此,犹如鱼和熊掌,不能兼得!山重水复,却总无路可通!

    最终的方案是:选择月旭的色谱柱,又优化了程序升温的方法,把一针的采集时间控制在20min内,因为后面的强极性物质保留时间比较久,峰展宽效应很明显,峰高很小,为一馒头峰,与苯甲醇和苯甲酸苄酯的峰高相比,完全可以忽略。最终就无视其的存在。

    这是最终方案做出来的色谱图:

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  • wsy18

    第1楼2013/10/27

    升温方法是怎么优化的呢?

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  • zhw19811005

    第2楼2013/10/27

    发现问题之后,最重要的是有清晰的思路

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  • wsy18

    第3楼2013/10/28

    思路要以经验来支撑。

    zhw19811005(zhw19811005) 发表:发现问题之后,最重要的是有清晰的思路

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  • 给力

    第4楼2013/10/28

    我也想问升温怎么优化的,冒似只更换了色谱柱

    wsy18(wsy18) 发表:升温方法是怎么优化的呢?

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  • wulin321

    第5楼2013/10/28

    应助达人

    优化控制升温的方法?

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  • 逆天一棍

    第6楼2013/10/28

    根据目标物的保留时间,通过调整柱流速和温度来进行保留时间的优化。

    wsy18(wsy18) 发表:升温方法是怎么优化的呢?

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  • 逆天一棍

    第7楼2013/10/28

    发现问题,分析问题,提出解决问题的方案,用实践验证方案的可行性。

    zhw19811005(zhw19811005) 发表:发现问题之后,最重要的是有清晰的思路

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  • 逆天一棍

    第8楼2013/10/28

    说的都很对。

    wsy18(wsy18) 发表:思路要以经验来支撑。

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  • 逆天一棍

    第9楼2013/10/28

    其实就是对柱流速及色谱柱的温度进行调整,看能否让保留时间提前。因为强保留物质保留时间提前的效率不高(这一块做的多而且碎,就没有贴图,一笔带过了),所以后来进行了色谱柱的更换。

    给力(huojuncai) 发表:我也想问升温怎么优化的,冒似只更换了色谱柱

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  • 逆天一棍

    第10楼2013/10/28

    是的,包括调节柱流速。

    wulin321(wulin321) 发表:优化控制升温的方法?

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