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色谱柱柱压过高的解决过程

逆天一棍

2013/11/20
光谱

问题出现：

我们有一根反相C18色谱柱，使用的流动相中含有较高比例缓冲盐溶液，最近发现柱压越来越高。

从最初做样时候的130bar，飙升到现在的210bar！

用10%的甲醇水冲洗过夜，用50%的异丙醇溶液冲洗过夜、用100%的异丙醇冲洗过夜，压力一直都没有降下来。

分析问题：

是什么原因引起的压力升高呢？

我们正常的色谱峰是这样子的：

从色谱图上看，最后面的辅料峰是一个平头峰，也就是说，对于这个辅料了来说，色谱柱是过载的。而且从其保留时间来看，与填料的极性比较相近，保留比较强。会不会这个有残留造成色谱柱的压力升高呢？

是不是还有一种可能，流动相中的缓冲盐的浓度有点大，然后每次冲柱的时候没有冲的太干净？我们的流动相中缓冲盐的质量体积分数达到了6.82g/L，摩尔体积分数在17.54mmol/L。不知道大家常用的缓冲盐的浓度有多大呢？

解决方案：

如果色谱柱中有残存的话，提高流动相的温度，可能会大大提高色谱柱中可能残存物的溶解能力，从而达到清洗色谱柱的目的。

而色谱柱的建议最高使用温度不超过60℃，因此，就试着调高柱温箱的温度到55℃来进行尝试。

冲洗了一会，感觉就很有效果，色谱柱的压力在稳步下降！

冲洗过夜后，压力降了不少！然后用100%的异丙醇小流速又冲洗了色谱柱，以期尽量冲洗干净色谱柱的残留物。

最后换成我们的流动相进了几针，色谱柱的压力与以前做样的时候在同一水平上！色谱图也没有太大的差异。

结论：

加热的办法，对冲洗色谱柱有很好的作用。

讨论：

1. 这个用柱温箱直接加热流动相的办法，不知道版友们在实际中有没有应用的到？而且，这个55℃的温度，会对色谱柱的填料产生影响吗？

2. 你们的流动相中用到缓冲盐的话，一般浓度是多大呢？我们流动相中的浓度，是不是太大呢？

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haiyuzhi

第1楼2013/11/21

我们都是反接色谱柱冲的

0

dahua1981

第2楼2013/11/21

应助达人

不会污染吗
haiyuzhi(haiyuzhi) 发表:我们都是反接色谱柱冲的

0

wsy18

第3楼2013/11/21

很好，可以耐60°的柱子55°应该不会有问题。

0

wsy18

第4楼2013/11/21

反冲应该是脱开检测器的吧。
dahua1981(dahua1981) 发表:不会污染吗

0

haiyuzhi

第5楼2013/11/21

跟楼下兄弟说的一样，断开检测器用大流速反冲
dahua1981(dahua1981) 发表:不会污染吗

0

haiyuzhi

第6楼2013/11/21

对的
wsy18(wsy18) 发表:反冲应该是脱开检测器的吧。

0

wsy18

第7楼2013/11/22

多大流速冲多长时间？

疑似很多人常用小流速冲洗过夜的。
haiyuzhi(haiyuzhi) 发表:跟楼下兄弟说的一样，断开检测器用大流速反冲

0

生活就这么美好

第8楼2013/11/23

一般是不过检测器的
wsy18(wsy18) 发表:反冲应该是脱开检测器的吧。

0

生活就这么美好

第9楼2013/11/23

估计是楼主每次做实验时的样品不过膜的原因，柱压高，冲洗之后压力降低，那就说明有不溶性东西在柱子里面的

0

生活就这么美好

第10楼2013/11/23

反冲时，一般应该用小流速把
haiyuzhi(haiyuzhi) 发表:跟楼下兄弟说的一样，断开检测器用大流速反冲

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