zhoujin83
第6楼2013/11/26
选缓冲盐要考虑以下几点:
1. 所选缓冲盐的缓冲范围是否包含需要的pH。比如你需要pH4.0的流动相,如果你选择了磷酸二氢钾,那么磷酸二氢钾在这个pH值是没有缓冲能力的,不太好。
2. 所选用的缓冲盐是否有吸收,会不会造成基线波动。比如选用了醋酸盐,而你的波长为220nm,那么基线噪声会很大,走梯度时基线漂移会很严重。
3. 一般情况下,缓冲盐的浓度从5mM-25mM就足够了,但是某些物质,能在流动相中电离,造成拖尾或出双峰,增加缓冲盐浓度能抑制这种电离,就能得到较好的色谱图。
4. 弱酸弱碱盐具有“弱离子对”的作用(这个弱离子对是我同事提出的,是一个形象的说法,不一定对),具有一定的选择性,如果其他条件都满足的话,更换缓冲液也许能提高分离度。比如我曾经有个方法,缓冲盐是醋酸铵,pH是4.0,有一个物质始终不能达到很好的分离,将缓冲盐换为甲酸铵后这个问题就解决了。
5. 据菲罗门公司说,常用缓冲液中,磷酸体系最伤柱子,挥发性盐会好一些。
这是我的一点经验,其他坛友请补充。
生活就这么美好
第8楼2013/11/26
磷酸二氢钾在4时没有缓冲作用,为什么呢?