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《CNW液相色谱柱使用征文大赛之一》：CNW液相色谱柱对大闸蟹色素的提取研究

zy178

2014/03/18

CNW液相色谱柱对大闸蟹色素的提取研究

1、实验背景

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)（以下简称河蟹）又称毛蟹、螃蟹，属甲壳纲、十足目、方蟹科、绒螯蟹属。主要分布在中国东部海域沿岸及通海的河流、湖泊中，具有很高的经济价值，是我国主要的养殖蟹类。在过去的几十年中，中华绒螯蟹迅速成为我国重要农业产品，目前我国的河蟹人工养殖发展较快，技术趋于成熟，由于其高营养价值受到广大民众的喜爱，故市场需求越来越大。河蟹品质评价主要从“靓肥绿大鲜腥甜”七个方面进行评判，因此，河蟹外观的美丑对河蟹的价值有很大的影响，但我国有关色素对中华绒螯蟹体色的影响研究还未见报道。故该实验主要从河蟹蟹壳色素出发，弄清河蟹色素含量与体色的关系。

2、实验目的

本实验采用丙酮提取组织色素，高效液相色谱法检测色素种类及含量，弄清河蟹组织成色与色素种类和含量的关系。

3、实验方法

3.1样品前处理

采集样品并冷冻干燥，将壳与性腺碾碎，肝胰腺可以不用碾碎。

3.2色素提取

（1）一般称取0.2-0.5g冷冻样品，

（2）将蟹组织转移至20ml安培瓶中，加4ml丙酮浸提，盖上瓶盖，50℃水浴震荡5h（用摇摆恒温温床200r/min）,取出安培瓶，吸出浸提液-20度保存，如此再浸提一次，最后将两次浸提液合并，并转移至15ml离心管中。

（3）离心：将总浸提液进行离心，-4℃离心机离心，4000r/min , 5分钟。

（4）定容：定容至25ml，用漩涡振荡器震荡均匀。

3.3色素检测

（1）用移液枪取1ml丙酮浸提液于小烧杯中，真空干燥箱蒸发丙酮。

（2）再溶解：将小烧杯取出放于冰盒上（注意避光），加入1ml正己烷（HPLC）再溶解。

（3）过滤：0.45um有机针式滤膜过滤，并将滤液转移至液相进样瓶中，盖好盖子。若不马上进行实验，则保存于-20℃。

（4）液相检测:

流动相：A:甲醇：水=75：25 和B :乙酸乙酯，流动相速度：0.5ml/min，进样量：20ul，温度：30 ℃ ，检测波长：470nm 。洗脱程序：B流动相 0.01----5min为30%，5- 15 min为30%-55%，15-20 min 为55% ，20-28min为55%-75%，28-35为75%，35-39 min为75%-30%，39- 50 min为30%。

4、标准曲线绘制

分别精确称取虾青素和β-胡萝卜素标准品各5mg，用正己烷定容至100ml，则4种标准品的浓度均为100ug/ml，分别取0.5、1、1.5、2、2.5ml标准品溶液定容至25ml，摇匀，取2ml标准溶液于进样瓶，以备HPLC检测，绘制标准曲线，如表1，图1所示。

5、讨论

5.1组织色素图谱分析

通过实验得到了河蟹各组织色素图谱如图2所示，其中蟹壳中主要是虾青素，而肝胰腺中主要是叶黄素及少量虾青素，卵巢中则主要有虾青素、角黄素、叶黄素、β-胡萝卜素。

从图2可以看出三种标准品峰峰型对称、尖锐，表明组分谱带宽，检测灵敏度高。另外，该图谱基线平，除肝胰腺之外无毛刺，基线无漂移。整体效果还可以，但也存在一些问题，比如该实验中色素出峰时间延后，20min时才出第一个峰。另外，在20min左右时出现三个峰，而且三个峰未能完全分开，当然这对蟹壳和肝胰腺影响不大，但对于卵巢还是有点影响的。

5.2 液相色谱柱使用评论及改进方法

在上文提到出峰时间延后，这主要是与流动相及柱子的极性相关，并非液相色谱柱单方面的原因。一方面可以对柱子的极性进行改进，使出峰的时间提前。因为在使用安谱液相色谱柱（CNW: Athena C18-wp 4.6mm*250mm *5um）之前，该实验使用的是岛津（shim-pack VP-ODS 150mm*4.6mm）液相色谱柱。该柱子出峰时间为6min左右，但岛津柱子有拖尾现象（图3所示），可能是由于该柱子不匹配色素试验或者柱子老化等原因，故换用CNW柱子进行试验。另一方面可以对流动相进行调整，试验结果的好坏主要受到试验方法与试验仪器的影响，如果匹配良好则试验结果良好，在该实验中虽然有点小问题，但不影响最终的结果，在以后的实验中可以改进方法。我校食品学院也使用该柱子，流动相为甲醇、二氯甲烷、乙腈和水的混合溶液，其出峰时间提前，但峰型并没有该实验方法的好。

总的来说，CNW: Athena C18-wp（4.6mm*250mm *5um）液相色谱柱是很好的，当时一心想买进口的柱子，在老客户李欲静的推荐下，于是抱着试一试态度买了CNW柱子，但结果还是令人满意的。当然如果公司能够对该柱子进行试验并找出最好的匹配方法来检测研究色素就最好了。另外，我对于安谱的服务也挺满意的，我喜欢找靠谱的客户进行购物，当然安谱没有让我失望。希望日后与安谱继续合作下去，同时希望安谱日后更加壮大。

精
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吕梁山

第1楼2014/03/18

不错的文章，加油

0

vcningmeng

第2楼2014/03/18

不错的文章，这么快就投稿了。动作神速

0

雾非雾

第3楼2014/03/18

应助达人

这种色素提取出来有什么用？

0

wsy18

第4楼2014/03/18

蟹壳中的虾青素与肝胰腺、卵巢中的虾青素有什么关联性吗？

0

vcningmeng

第5楼2014/03/18

这个还真不知道啊
wsy18(wsy18) 发表:蟹壳中的虾青素与肝胰腺、卵巢中的虾青素有什么关联性吗？

0

wsy18

第6楼2014/03/18

如果有关联性就可以参考蟹壳挑选螃蟹了。

这个虾青素是好东西，有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤以及预防心脑血管疾病作用。
vcningmeng(vcningmeng) 发表:这个还真不知道啊

0

逆天一棍

第7楼2014/03/19

那么，以后吃螃蟹要带壳吃喽？
wsy18(wsy18) 发表:如果有关联性就可以参考蟹壳挑选螃蟹了。

这个虾青素是好东西，有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤以及预防心脑血管疾病作用。

0

vcningmeng

第8楼2014/03/19

好像有专门的保健品公司从壳里面提取出来的。
逆天一棍(fengmo4668) 发表:那么，以后吃螃蟹要带壳吃喽？

0

wsy18

第9楼2014/03/19

应该研究如何利用肝胰腺与卵巢中的虾青素。

蟹壳中的虾青素可以提炼。
逆天一棍(fengmo4668) 发表:那么，以后吃螃蟹要带壳吃喽？

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逆天一棍

第10楼2014/03/19

这个一提取，价格不知道要上涨多少倍，还是吃螃蟹划算。
vcningmeng(vcningmeng) 发表:好像有专门的保健品公司从壳里面提取出来的。

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