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平皿计数法检测微生物细菌总数

郭景祎

2014/03/18

最近突发奇想，微生物检测细菌总数这一项目要求培养时间是48h，那要是超过两天会是什么样呢？所以在本月的全分析检测中，我多过了一天取培养皿，看看是什么样的，把结果用照片的方式给大家分享一下。由于害怕在中途取出来后拍照会干扰检测结果，所以原本的检测结果没有照片，只有多培养一天后才肆无忌惮拍出来的照片。

以下是标准操作规程：

1.1 标准依据
本方法标准依据《生活饮用水标准检验法》(GB/T5750.12-2006)。
1.2 方法原理
细菌总数是指水样在一定条件下培养后(培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等)所得lmL水样所含菌落的总数。按本规范规定所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。
1.3 试剂与培养基
1.3.1 营养琼脂
成分： A.蛋白胨10g B.牛肉膏 3g C.氯化钠 5g
D.琼脂 10～20g E.蒸馏水 1000mL
1.3.2 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中(如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤)，经121 ℃灭菌20min，存于冷暗处备用。
目前我们采用的是购置的已经配好的粉末，直接溶解灭菌就可使用
1.4 仪器
1.4.1 高压蒸汽灭菌器。
1.4.2 干热灭菌箱。
1.4.3 培养箱36±1℃。
1.4.4 电热套。
1.4.5 放大镜或菌落计数器。
1.4.6 灭菌试管、平皿(直径9cm)、刻度吸管、采样瓶等。
1.5 检验步骤
1.5.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取lmL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45 ℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。
1.5.2 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36±1 ℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为水样lmL中的细菌总数。
1.6 菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。

下图是多培养一天后的检测结果，黑色圈出来的两个黄色菌落是原有的，蓝色圈出来的是第三天新长出来的，是白色的菌落，我全部数了一下，是48个。

看来培养的时间一长了还真有影响，菌落一下多了好多，标准中说不管大小，都要计数，限值是100个/mL，对检测结果的影响还是很大的。

PS:另外还有一件事情是我不能理解的，同一个培养基培养出来的菌落为什么颜色不一样呢？欢迎大家来讨论

上图中黑色圈出来的菌群是黄偏红色的，绿色圈出来的是白色菌落，橘色圈出来的是黄色菌落，大家知道是为什么？

上图也是一黄一偏橘黄色

下图很明显是偏红色的菌落

分
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aaaa2012

第1楼2014/03/18

营养琼脂中计数的是菌落总数，不单单是哪一种菌，好多种菌都可能生长

0

郭景祎

第2楼2014/03/18

应助达人

所以才会有不同颜色么？我觉得培养基一致，颜色应该也不会差哪儿去，看来细菌还是有不同的
aaaa2012(v2830723) 发表:营养琼脂中计数的是菌落总数，不单单是哪一种菌，好多种菌都可能生长

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aaaa2012

第3楼2014/03/18

当然不是同一种了，有时候还会长出霉菌呢
郭景祎(guojingyi-2010) 发表:所以才会有不同颜色么？我觉得培养基一致，颜色应该也不会差哪儿去，看来细菌还是有不同的

0

郭景祎

第4楼2014/03/19

应助达人

这还真没见过，就是黄色和白色的最多，最近发现有红色的
aaaa2012(v2830723) 发表:当然不是同一种了，有时候还会长出霉菌呢

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吱吱吱2105

第5楼2014/03/19

挺有趣的一个实验，等我们微生物实验室建好以后，我得尝试培养2-7天的细菌，看看每天都有什么新变化，最后都能长出什么细菌。

0

郭景祎

第6楼2014/03/19

应助达人

对啊，以前都没想过多培养出来会怎样，这下知道了
吱吱吱2105(0311050111) 发表:挺有趣的一个实验，等我们微生物实验室建好以后，我得尝试培养2-7天的细菌，看看每天都有什么新变化，最后都能长出什么细菌。

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whuisvfg

第7楼2014/03/19

这种培养基虽然是无选择性的，营养成分也不算高，但一般的细菌都可以生长。自然界细菌的种类太多啦，要想一一鉴别出来，恐怕很难，也无必要。一般可通过镜检核生化特性做个大概分类。

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郭景祎

第8楼2014/03/20

应助达人

镜检现在还不是很熟练，倒是有显微镜，不过我还没用过
whuisvfg(whuisvfg) 发表:这种培养基虽然是无选择性的，营养成分也不算高，但一般的细菌都可以生长。自然界细菌的种类太多啦，要想一一鉴别出来，恐怕很难，也无必要。一般可通过镜检核生化特性做个大概分类。

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名字长了容易引起注意

第9楼2014/03/20

应助达人

是不是细菌种类不一样所以颜色不一样？

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名字长了容易引起注意

第10楼2014/03/20

应助达人

用显微镜能看到非常详细的细菌吗？
郭景祎(guojingyi-2010) 发表:镜检现在还不是很熟练，倒是有显微镜，不过我还没用过

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