三聚氰胺,简称三胺,分子式C3N6H6,是一种重要的氮杂环有机化工原料。由于三
聚氰胺分子中含有大量氮元素,而普通的全氮测定法测饲料和食品中的蛋白质含量时不能排
除这类假蛋白氮的干扰,因而一些厂商为了能降低成本而添加这种化工原料,以提高产品中
蛋白质含量。长期或反复大量摄入三聚氰胺可能对肾与膀胱产生影响,导致产生结石。奶粉中相继查出含大量的三聚氰胺,故测定饲料中是否含有三聚氰胺,具有重大意义。
1、材料和方法
1.1 主要仪器和试剂
岛津高效液相色谱仪LC-10Avp
高速离心机(10000r/min);
超声波震荡仪;
涡旋混合器;
分析天平(万分之一);
溶剂过滤器(带0.45um有机、水系过滤膜和真空泵);
乙腈(HPLC级);
三聚氰胺(≥99.0%);
三氯乙酸(优级纯);
柠檬酸(分析纯);
辛烷磺酸钠(色谱级);
水(二次蒸馏水以上);
2. 三聚氰胺提取
称取2g(精确至0.01g)粉碎试样于50mL具塞塑料离心管中,加入15mL1%三氯乙酸和5mL乙腈,超声提取10min,再振荡提取10min后,以不低于4000r/min离心10min,上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后,用三氯乙酸溶液定容至25mL,移取5mL滤液,加入5mL水,混匀后待净化液。
3. 净化步骤净化
SPE柱:月旭Welchrom® P-SCX固相萃取柱(60mg/3 mL);Part NO: WSS46180101
a)活化:依次加入3mL甲醇、5mL水活化,流出液弃去;
b)上样:将提取液加入月旭Welchrom® P-SCX柱中,流出液弃去;
c)淋洗:依次用3mL水、3mL甲醇淋洗,淋洗液弃去;
d)洗脱:用6mL 5%氨水-甲醇溶液洗脱,收集洗脱液;
e)浓缩:用氮气或者水浴蒸发至干,残留物用1mL流动相定容,涡旋混合1min,过微孔滤膜后,供HPLC分析;注:整个固相萃取全过程采用的自然重力流速过柱,不需要加压也不需要抽真空。
4. 色谱条件色谱柱:色谱柱:Welchrom-C18 ( 250 mm ×4.6 mm 5μ ); Serial Number:W13212257;
流动相 : 乙腈:10mM/L柠檬酸+10mM/L辛烷磺酸钠缓冲液=10:90(pH=3.0)
流速:1.0mL/min
进样量:10μL
柱温:40 ºC
检测波长:240nm
三聚氰胺标液色谱图
工作曲线:
样品测定数据:
图3 某样品的色谱图
加标回收率:
结论:采用月旭Welchrom® P-SCX固相萃取净化柱(60mg/3 mL)及月旭Ultimate® XB-C8(4.6 x 250mm, 5μm)色谱柱测定饲料中的三聚氰胺,具有检测灵敏度高、精密度高、准确度高、线性范围好和回收率高等优点,完全符合分析要求,适合各类饲料中三聚氰胺的快速检测。