[六月份原创]牛奶中黄曲霉毒素M1的检测

黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂，因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取，对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化，荧光检测器测定牛奶中黄曲霉毒素M1。
检测依据：GB5413.37-2010
设备和耗材
黄曲霉毒素免疫亲和柱：Welchrom IAC 3 mL/支；

高效液相仪岛津LC-10Avp（带荧光检测器）；

黄曲霉毒素M1标准品（用甲醇稀释配制成工作所需的标准使用液）；

PBS 缓冲溶液：称取1.16 g Na2HPO4，0.20 g KH₂PO₄，8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中，用HCL或NaOH调节pH至7.4，然后定容至1000ml。

甲醇（色谱纯）；

乙腈（色谱纯）；

样品前处理

称取50g(精确至0.01 g)混匀的样品，置于50 mL具塞离心管中，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化；

免疫亲和柱净化（3mL）

• 将IAC装于固相萃取装置上，接上大体积上样器，10ml PBS溶液活化柱子，流速保持在2–3 ml/min，确保上样前柱子保留少量（0.5ml）的PBS溶液，活化液不收集；
• 取待净化液25mL加入免疫亲和柱，流速不超过5 mL/min，不收集流出液；
• 用约20ml去离子水淋洗柱子，流速不超过5 mL/min，抽真空1分钟，不收集流出液；
• 用2.0mL甲醇洗脱，流速控制在1滴/秒，收集洗脱液过膜后上机测试。

注：免疫亲和柱从冰箱去除需升到室温后使用。

色谱条件：

色谱柱： 色谱柱：Welchrom-C18 ( 250 mm ×4.6 mm 5μ ); Serial Number：W13212257；

流动相：水 : 乙腈=75 : 25 ；流速：1mL/min；

柱温： 35℃

检测波长：发射波长：430nm(狭缝10nm)，激发波长：360nm(狭缝10nm)；

进样量： 10uL

5ng/mL的黄曲霉毒素M1标准使用液色谱图：

10ng/mL黄曲霉毒素M1色谱图：

工作曲线系列：0、5、10、15、20、40ng/mL的黄曲霉毒素M1标准使用液。

牛奶样品色谱图

样品中加入1.0mL20ng/mL的黄曲霉毒素M1标液到牛奶样品1中与样品同时同样进行处理，样液上机后测定的色谱图：

结论：采用黄曲霉毒素免疫亲和柱：Welchrom^® IAC 3cc、色谱柱： Ultimate^® XB-C18 250 mm x 4.6 mm，5µm、高效液相色谱荧光检测器法来检测牛奶中的黄曲霉毒素M1，方法简单，重现性好，回收率试验满足要求。