谈谈pH值的大小对液相色谱的影响

流动相pH值对反相HPLC的保留时间有影响。

应助达人

采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱。另外色谱柱都有一定的耐受范围，在流动相的配制过程和使用过程中不能超过色谱柱的耐受范围，否则会损害色谱柱。

嗯，相当有道理~~嘎嘎

学习了，以前一直不懂

学习了……

在实际方法开发过程中，我们其实很少能知道化合物的pKa，但是我们至少应该能知道化合物的结构，能初步的判断其酸碱性。如果化合物是中性分子，那么其保留基本不会因为流动相的pH变化而变化；另外还有一些化合物，其虽然带有酸碱基团，但是也对流动相的pH变化不敏感。我曾经做6-溴-2-氨基吡啶及其异构的HPLC方法开发，在我调整流动相pH以调整分离度的过程中，发现其中一个异构就是如此。