利用固相萃取技术萃取植物激素ABA求助

SPE固相萃取

SPE C18固相萃取小柱 6ml 500mg

1.活化

6ml色谱甲醇过柱，滴速为宜。

2.平衡

6ml去离子水过柱，滴速为宜，当水液面要比填料上表面高1mm左右，再上样。

3.上样

取上图第四步离心后的上清液过C18小柱，滴速为宜。过柱前上清液要利用1%乙酸调节pH至2.5-3.0之间。

4.淋洗

5%甲醇溶液，6ml淋洗过柱，去除杂质。抽干

5.洗脱

用2-4倍柱床体积的95%色谱甲醇洗脱。

这是我初步想的方法，用来进行ABA前处理，之后准备在进行一系列操作进行HPLC检测。但是有几个问题

1.活化用的甲醇浓度一般是多少？

2.关于提取剂，我查了文献有的说可以利用80%甲醇进行浸提。有的说利用改进的Bieleski混合液（甲醇:甲酸：水=15:1:4，v/v/v），这个Bieleski里面用的甲醇和甲酸是百分之多少的？

3.再就是淋洗这一步，我测定的植物激素是利用反相萃取方法，淋洗为了把干扰物质洗去，应该用多少的甲醇呢？我的ABA溶解在80%的甲醇中。

4.最后洗脱，用的甲醇浓度多少呢？

希望来人解答万谢！！很急的