PXC固相萃取一高效液相色谱法测定四川泡菜中的多菌灵、克百威

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2014/07/09

私聊

农残检测

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PXC固相萃取一高效液相色谱法测定四川泡菜中的多菌灵、克百威

摘要：通过对四川泡菜进行固相萃取一高效液相色谱法测定多菌灵、克百威残留量。样品经乙酸乙酯提取后，PXC固相萃取柱提取净化，HP$$lc法测定。在添加水平为1,5,20μg/g时，多菌灵的回收率在86.3%一92.3%之间;RSD<5%(n=6)，检出限为0.03mg/kg，克百威的回收率在76.3%一89.4%之间;RSD<5% (n=6)，检出限为0.06mg/kg，该方法的测定结果满足农药残留量的检测要求。

关键词：固相萃取；高效液相色谱法；四川泡菜；多菌灵；克百威

多菌灵[carbendazim,N -(2-苯并咪噢基)氨基甲酸甲醋，多菌灵又名棉萎灵、苯并咪唑44号，结构式为

。多菌灵是一种广谱性杀菌剂，对多种作物由真菌（如半知菌、多子囊菌）引起的病害有防治效果。可用于叶面喷雾、种子处理和土壤处理等。能防治水稻、棉花、四川泡菜、果树等多种作物的多种病害，但它的残效期比较长，对哺乳动物有一定的毒性[1]，因此农产品中多菌灵残留量的测定越来越受到重视。

克百威化学名称为:2,3一二氮-2,2一二甲基苯并吠喃-7一基N一甲基氨基甲酸醋,又名呋喃丹，结构式为：

，是一种广谱性杀虫、杀线虫剂，具有触杀和胃毒作用。它与胆碱酯酶结合不可逆，因此毒性甚高。能被植物根部吸收，并输送到植物各器官，以叶缘最多。土壤处量残效期长，稻田水面撒施残效期短。适用于水稻、棉花、烟草、大豆等作物上多种害虫的防治，也可专门用作种

子处理剂使用。克百威毒性高，使用时只批准拌种用，严禁喷施克百威,但由于克百威杀虫效果好，被个别不法人员用在蔬菜的产生加工环节上,由于四川泡菜具有生产集中、流通广等特点，如出现食品安全事件涉及范围广，因此要求快速、灵敏、准确地同时检测出未知农药残留，对检测技术提出了新的要求[2]。在食品安全监管工作中除做好宣传工作外，对其快速定量测定也是有效监管的重要手段。

多菌灵的测定方法有国家标准《水果、蔬菜中多菌灵残留的测定高效液相色谱法》（GB/T23380-2009），而克百威目前没有专门的标准测定方法，通过结构式可以发现多菌灵和克百威氨基甲酸酯类农药，笔者采用GB/T23380-2009所给出的方法加以改进，采用PXC混合阳离子固相萃取柱提取和净化样品与高效液相色谱联用测定四川泡菜中多菌灵、克百威残留量,不仅方法简单、快速，为四川泡菜的日常监测提供了准确、可靠的数据。

1 实验部份

1.1 仪器和试剂

$$lc -20AT高效液相色谱仪：配有SPD-M20A检测器（日本岛津制造所)；氮吹仪(Organomation Associates Jnc)；二十四位固相萃取仪（SUPE$$lcO）；PXC固相萃取柱(规格：3mL,60mg ,Dikma)；过滤膜为0.22μm有机系膜(天津津腾科技发展有限公司)。水为去离子水；乙酸乙酯和甲醇、乙腈均为色谱纯；多菌灵、克百威标样(购于农业部环境保护科学研究检测所，100μg/mL)。

1.2 色谱条件

色谱柱： Inertsil ODS-SP不锈钢柱(5μm 4.6×250mm 岛津公司)；流动相：V(乙腈) +V(0.02mol/L磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，并用磷酸调节pH 6.8)=40+60，流速为1.0 mL/min。进样量：20μL。柱温：30℃。检测波长:286 nm[3]。

1.3 实验方法

1.3.1 标准溶液配制：准确将100μg/mL的多菌灵和克百威标准品，分别吸取标准溶液5，10，20, 50, 100, 200, 500μL置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度线，，得质量浓度分别为,0.05，0.1, 0.2, 0.5, 1, 2，5μg/mL的系列标准溶液。摇匀待用。

1.3.2 样品前处理

1.3.2.1提取

取5.0 g制备好的泡菜匀浆于50 mL离心管中，加人2g硅藻土和5g无水硫酸钠，搅拌均匀，加入20mL乙酸乙酯，在涡旋混匀器混匀1min,再用超声波提取5分钟，于离心机6000r/min下分离5min，收集乙酸乙酯液层于浓缩瓶中，再分别用10mL乙酸乙酯超声提取三次，合并乙酸乙酯液层于浓缩瓶中。在氮吹仪40℃下吹至近干，用6mL 0.1mol/LHCI溶解浓缩液，待净化。

1.3.2.2净化

将小柱用3mL甲醇活化，加3mL水平衡，以2 mL/min(约每分钟三滴)的流速过柱，依次用3 mL水和3mL甲醇淋洗，流出液弃去，真空抽滤后，然后再用6mL5%氨水甲醇溶液对保留在柱上的样品进行洗脱，洗脱流速2mL/min，将洗脱液收集试管中，在40℃下用氮气吹只近干，用1mL甲醇溶解，过0.22μm微孔滤膜后上机进行检测。

2 结果与讨论

2.1 固相萃取的选择对测定的影响

在相同处理条件下未使用和使用表现为基线波动大，杂质峰较多，对测定有很大的干扰，同时检出限增大，灵敏度降低，从图中看出，选用固相萃取后四川泡菜样品中的待测组分得到了良好的净化和富集。

图3自然环境下多菌灵、克百威标准品的稳定性图4 冷藏避光条件下多菌灵、克百威标准品的稳定性

Fig.3 The stability of carbendazim and carbofuran Fig.4 The stability of carbendazim and carbofuran

standard under natural environment. standard under refrigerated dark conditions.

因此建议标准品要做好避光冷藏保存，同时临使用时配制混和标准液，以防止两种组分可能产生的相互作用。

2.4 标准工作曲线的绘制

采用1.3.1配成的标准溶液，在1.2条件下测定，结果表明测定浓度与响应值线性关系良好，R＞ 0.999。

表1 回归方程和线性范围

Tab.1 Regression equation and linear range

组分名称回归方程 R值线性范围

多菌灵 y=1.4714e-005*x-0.0467371 0.9999 0.05～5.0μg/mL

克百威 y=5.57655e-005*x+0.0794964 0.9988 0.05～5.0μg/mL

2.5 加标回收率和精密度

按照本方法操作，进样量为20 uL，相当于进样100mg，添加多菌灵、克百威浓度均为0.005mg/kg 时，与样品空白的基线噪声的3倍计算出最低检出限，多菌灵的最低检出限为0.03mg/kg，克百威的最低检出限为0.06mg/kg。

表2 回收率实验测定结果

Tab.2 The results of recovery test

待测物加入量回收率 RSD

(μg/g) (%) (%,n=6)

1 86.3 4.7

多菌灵 5 90.4 3.2

20 92.3 3.2

1 76.3 4.5

克百威 5 82.6 4.1

20 89.4 3.6