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【许愿原创】色谱峰保留时间漂移的对策

  • 逆天一棍
    2014/07/28
  • 私聊

厂商论坛

  • 一、背景:

    我们的色谱柱一般都是这样处理的:下午进针,做样到半夜结束,设置自动冲洗色谱柱方法冲洗色谱柱(先用5:95的乙腈-水冲洗干净色谱柱中的缓冲盐,如果第二天没有样品要做,就用异丙醇清洗色谱柱里可能吸附的油性杂质,然后保存色谱柱;如果第二天有样品需要检验,就光洗干净盐即可,第二天也有利于色谱柱的平衡)。

    色谱条件是这样的:Agilent 1260液相色谱仪,博纳艾杰尔色谱柱,Venusil XBP C18L),4.6mm*150mm5μmCatVX951505-LS/NV9520515BM0106),流动相A为磷酸盐溶液(pH7.0-乙腈(75:25),流动相B为乙腈。0min100%的流动相A,至40min时流动相A比例为50%,流动相B50%41min时调整为流动相为100%,维持4min。检测波长为240nm,进样量为10μL,流速为1ml/min

    二、问题:

    这样已经坚持一段时间了,一直都好好,前两天突然发生状况了。

    具体是这样:

    头天的出峰情况如此:



    保留时间的重现性还挺好,波动很小。

    可第二天平衡好柱子后,再进样品,保留时间就有变化了:



    放到一块看,差异更明显。



    两者是同一根色谱柱,同一瓶流动相(没有更换),同一台仪器,不同的只是进样时间不一样。出现如此现象,到底为何呢?

    三、分析

    分析可能导致的原因:

    1.色谱柱没有平衡好;

    2.缓冲盐的通道有析出,堵塞管路,导致缓冲盐出液量不够,相当于增加了乙腈的比例,导致出峰提前;

    3.混好的流动相A中的水和乙腈相分离,导致不同高度液面位置的乙腈和水的比例不同。

    4.流动相B的乙腈聚合,也相当于改变了流动相的比例;

    四、应对措施:

    1.70℃的水浴加热纯净水,冲洗全部4个通道,不管是有析出的盐,还是有乙腈聚合吸附,都可以有效清除;

    2.更换过滤白头;

    3.做完实验后,第二天用5:95的乙腈-水冲洗流动相A通道半小时,消除可能析出的盐类影响。然后再去平衡色谱柱。

    五、结果

    效果还不错,保留时间又回到了原来的状态。又可以顺顺利利的做实验了。
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  • 三人行

    第1楼2014/07/28

    缓冲盐的通道有析出,管路有轻微堵塞。

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  • dahua1981

    第2楼2014/07/29

    应助达人

    如果用缓冲盐的话常有的事

    三人行(jncxyy2012) 发表:缓冲盐的通道有析出,管路有轻微堵塞。

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  • ECHO007

    第3楼2014/07/29

    多冲洗下管路。

    三人行(jncxyy2012) 发表:缓冲盐的通道有析出,管路有轻微堵塞。

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  • 三人行

    第4楼2014/07/29

    用温水冲洗比较好。

    ECHO007(v2769262) 发表:多冲洗下管路。

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  • wslmpol

    第5楼2014/07/29

    冒昧问一句,楼主所说的 《分析》 的第三点有可能存在么?我认为乙腈和水是混溶的,两种溶剂只要混匀之后,不管放多久都不会出现不均匀的情况,不知道对不对?

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  • ECHO007

    第6楼2014/07/30

    三人行(jncxyy2012) 发表:用温水冲洗比较好。

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  • 逆天一棍

    第7楼2014/07/30

    有可能是这样的情况。

    三人行(jncxyy2012) 发表:缓冲盐的通道有析出,管路有轻微堵塞。

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  • 逆天一棍

    第8楼2014/07/30

    咨询过工程师,工程师更倾向于是乙腈聚合的原因导致的。

    dahua1981(dahua1981) 发表:如果用缓冲盐的话常有的事

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  • 逆天一棍

    第9楼2014/07/30

    要必须很经常的清洗。严重耽误进度啊。

    ECHO007(v2769262) 发表:多冲洗下管路。

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  • 逆天一棍

    第10楼2014/07/30

    工程师建议的是70℃的热水冲洗。

    三人行(jncxyy2012) 发表:用温水冲洗比较好。

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