【求助】请教高手:如何确定荧光物质的激发与发射波长??

应助达人

严格的说你的这个问题不是三言两语能讲清楚的，最好参考有关书籍，如近期出版的【荧光分析法】一书。同时也不知你使用的是何种型号的仪器，只能简单的略说一二：
（1）如果你的仪器有三维扫描功能，那就非常简单了，按照说明书要求去做就可以了。
（2）如果仪器没有上述功能，一般可将仪器的激发波长(EX)先设定为200nm，然后进行发射波长(EM)模式扫描，(EM)波长范围暂设定为210－800nm，然后记录所有出现的峰值波长；改变激发波长(EX)后再扫描，如第二次发射图谱中的某个（或某些）峰的位置没有位移（或位移很少），一般来说这个（或这些）峰就是荧光峰；因为荧光峰的位置是不随激发波长的改变而改变的，仅是峰高（或峰面积）发生改变
（3）将确定的荧光峰的波长作为发射波长(EM)固定下来，再做激发波长(EX)的扫描，激发波长的范围要小于发射波长（根据斯拖克斯定律）；如果仅出一个峰则很简单确立下来，再将这个波长固定下来重新做真正的发射波长(EM)扫描，可以得到良好的信噪比的结果值；如果做激发波长(EX)扫描后出现几个峰，则需要有经验的选择了，一般选择峰形高度适合并又有一定带宽的峰为激发波长。

安工说的很有道理,我想再补充一点,如果固定发射找到多个激发的话,也可以参考荧光光谱的特性------------激发和发射呈镜象的特点来确定激发波长.

应助达人

补充得非常及时和正确

很好 谢谢

操作细节有些.......

定激发波长，扫描，出现一个或几个峰，变换激发波长再用确定的峰做发射波长扫描激发波长

学到了，谢谢！！

長見識了, 多學一點總少學一點好.