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聚丙烯凝胶电泳安全操作及相关知识介绍

然姐

2015/09/17

在基因克隆过程中，开发标记是一个重要过程，而在筛标记的时候，群体往往很大，聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacryamide gel electrophoresis,PAGE）能够适应这种大群体筛标记，帮助实验人员开发标记，因此多年来一直被广受各大实验室应用。
有关PAGE的简介已经可以从很多途径获得了，因此我把这方面的内容附在文后，主要想写的是有关PAGE的安全操作。
我曾经做过一个采访，当然不是正式的，范围仅限本实验室需进行PAGE实验操作的实验人员，问题是如果有其他选择，是否愿意来跑PAGE，为什么？98%都回答不想跑，所有女生都表示没得选择，只为毕业。听到这样的结果每个人估计会有不同的猜想了，为什么呢？请看下面分解。
首先，PAGE实验过程中用到的很多试剂对人体毒害很大，比如硅化剂和反硅化剂含有对呼吸道和批发有刺激作用的物质。其次，PAGE是一个长期的实验过程，长期处于一个毒性的环境中不可避免的人体会受到伤害。所以提高PAGE实验的安全意识很有必要。

1 佩戴手套，口罩。实验时用防护性好的手套，多戴几层，避免实验操作中有些不经意中划破了。普通口罩带两层，有条件的可以带防毒面具。
2 配置通风橱。进行有关有毒试剂操作时，尽量在通风橱内进行。
3 室内通风透气。实验室内空气要和外界流通，避免吸入过多有害气体。
4 及时清理垃圾，保持环境清洁。泡胶的池子要及时清理，防止有害物质滋生蔓延。
5 有毒试剂统一集中处理。类似银染液、显色液需集中收集，送至专门的有毒试剂处理处处理，不能随便倾倒，不应直接导入水池中。
聚丙烯酰胺凝胶电泳给科学研究带来了不可估量的作用，既然不能避免不做实验，那我们应该提高实验安全意识，减少实验危害。
附：PAGE相关知识介绍：

1 原理
PAGE是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，聚丙烯酰胺凝胶是丙烯酰胺单体在TEMED和过硫酸铵共同作用下聚合形成长链，长链在交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂作用下形成的三维网状结构物质。
2 适用范围
不同大小的DNA的要配置不同浓度的胶，比如，3.5%的丙烯酰胺有效分离100-2000bp的DNA片段，这是由聚丙烯酰胺凝胶孔径大小决定的，而丙烯酰胺和交联剂的浓度和比例决定了聚丙烯酰胺凝胶孔径，因此，在制胶之前先要根据DNA片段大小选择试剂用量。PAGE分离效果强，电泳的分辨率高，适用于小DNA片段分离，是利用连续或不连续的pH梯度原理，在电泳时，样品被压缩成一条狭窄的条带，清晰可见，5-500bp的片段之间即使仅差1bp也能分开。
3 步骤简介及改进
聚丙烯酰胺凝胶电泳包括聚丙烯酰胺凝胶的制备、凝胶电泳、显色-银染三个大的部分，操作步骤较多，一套流程下来需要三个小时左右，比较费时费力，因此有些人在该方法做了一些改进，以求加快实验进度，提高实验效率。如利用电解质梯度变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统对稻纵卷叶螟取食的水稻叶片进行cDNA-AFLP分析,结果表明产生的cDNA条带比普通变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统大约增加30%,解决了传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳在同一块胶板中大片段DNA条带堆积而小片段DNA条带间距过大,且读带数量有限的问题（曹蕾等，附件农林大学学报，2007）。

A.普通变性聚丙烯酰胺凝胶(质量分数为5%);B.电解质梯度变性聚丙烯酰胺凝胶(质量分数为5%).

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