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鸡肉中喹诺酮类药物残留的检测

lhq84142248

2015/11/27

兽药/抗生素检测

鸡肉中喹诺酮类药物残留的检测
一、方法原理
鸡肉中残留的氟喹诺酮类药物（环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星）用磷酸盐缓冲液提取，经HLB固相萃取柱净化，流动相洗脱后。用液相色谱-荧光检测器测定，外标法定量。
二、仪器设备
安捷伦1100高效液相色谱仪（配荧光检测器）
涡旋振荡器
冷冻离心机
固相萃取装置
三、实验部分
★试剂的配制
1．磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾6.8g,加水溶解并稀释500ml，用5.0mcl/ml氢氧化钠溶液调节（PH=7.0）
2．磷酸/三乙胺溶液（0.05mcl/l）取85﹪磷酸3.4 ml，用水稀释至1000ml，用三乙胺调节PH=2.4.
3．标准工作液的配制
3.1 分别称取盐酸环丙沙星、甲磺酸达氟沙星、恩诺沙星、盐酸沙拉沙星对照品各约25mg,精密称定，分别于25ml棕色容量瓶中，用0.03mcl/l氢氧化钠溶液稀释成浓度 ,分别为1mg/ml的储备液。（达氟沙星储备液浓度配制成0.2mg/ml）
3.2混合标准中间液分别量取1mg/ml（0.2mg/ml）的储备液各0.1ml于50ml容量瓶中，用流动相稀释成浓度为2ug/ml(0.4ug/ml)的混合标准中间液。
★方法步骤
1.质量控制样品的制备
1.1空白样品取空白试样，与待测样品同步处理。
1.2添加样品取空白样品，添加2ug/ml(0.4ug/ml)的混合标准中间液0.1ml，制的浓度为100ug/kg的阳性添加试料，与待测样品同步处理。
2.提取

2.1取匀浆的试料2±0.02g,置50ml离心管中，加磷酸盐缓冲液10.0ml，涡旋混合，中速震荡5min,14000r/min离心10min,倾取上清液。（磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾6.8g, 加水溶解并稀释500ml，用5.0mcl/ml氢氧化钠溶液调节PH=7.0）

2.2用磷酸盐缓冲液10.0ml重复提取一次。合并两次上清液，备用。
3.净化
3.1 固相萃取柱依次用甲醇2ml,磷酸盐缓冲液2ml预洗。
3.2 取上述备用液体5.0ml过柱。
3.3 用水2ml洗柱，挤干。
3.4用流动相2.0ml洗脱，收集，挤干，涡旋混合。过0.22um微孔滤膜，供上机测定。
4.系列标准工作液的制备
精密量取混合标准中间工作液，用流动相稀释成浓度为5、10、20、50、100、200、500ng/ml的系列标准工作液。
★仪器色谱条件
色谱柱：C18（4.6×150mm 5um）；
柱温：30℃；
流动相：0.05mcl/l磷酸溶液/三乙胺-乙睛（87+13）；
流速：1.0ml/min;
进样量：20ul;
检测波长：激发波长280nm;发射波长450nm.
★结果分析
1、线性范围
取系列标准工作液进样，以峰面积为纵坐标，以药物浓度为横坐标绘制标准工作曲线。结果表明（见表1），在系列标准工作液浓度范围内，喹诺酮类药物峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.准确度的测定
称取同一来源的空白鸡肉样品3份,每份2.0g,分别添加2ug/ml(0.4ug/ml)的喹诺酮类药物溶液0.1ml的阳性样品,按本方法测定,计算回收率,见表2

四、结论
本文建立鸡肉中喹诺酮类药物的液相色谱-荧光测定的方法。鸡肉样品经磷酸盐缓冲液提取后，经固相萃取柱净化后，采用液相-荧光检测器法测定，外标法定量，经检测被测样品没有检测出含喹诺酮类药物残留成分，阳性添加样品的回收率为73.1%-84.5%，相对标准偏差为1.8%-5.4%（n=3）.本方法系列标准工作液浓度范围内，喹诺酮类药物峰面积与浓度呈良好的线性关系，准确度好、适用于鸡肉中喹诺酮类药物残留的检测。

空白鸡肉样品的色谱图

100ug/kg空白鸡肉添加试样中氟喹诺酮类药物色谱图

20ng/ml 标准溶液中氟喹诺酮类药物色谱图

精
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相关话题

骏马奔腾

第1楼2015/11/28

应助达人

高效液相测和LCMS检测结果比对如何呢？

0

lhq84142248

第2楼2015/12/04

还没做这个比对。回头比比看！

骏马奔腾(langhuashang)发表:高效液相测和LCMS检测结果比对如何呢？

0

yuanxuzhou

第3楼2015/12/07

回收率怎么样啊

0

lhq84142248

第4楼2015/12/08

还可以吧

yuanxuzhou(v2890184)发表:回收率怎么样啊

0

无为

第5楼2015/12/11

要说准确肯定液相色谱要优于液质的了，就检测低限而言比液质还要差一些。灵敏度够用就好。

0

lhq84142248

第6楼2015/12/12

同意楼上说法！
无为(taodali) 发表:要说准确肯定液相色谱要优于液质的了，就检测低限而言比液质还要差一些。灵敏度够用就好。

0

栀子花开

第7楼2015/12/29

应助达人

做过这个方法，回收率还可以，但过柱很慢，必须加负压才行

0

我是风儿

第8楼2015/12/29

应助达人

分离效果还不错

0

hujiangtao

第9楼2016/01/22

应助达人

1025-14的方法也不错，是过C18的柱子

1

lhq84142248

第10楼2016/01/24

HLB柱子也可以的
hujiangtao(hujiangtao)发表:1025-14的方法也不错，是过C18的柱子

0

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