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关于样品处理挥干后复溶的问题

液质联用(LCMS)

  • 文献中在样品处理时,经过萃取或spe后,会进行挥干-复溶,经常会见到使用100uL的溶剂或洗脱液进行复溶。
    但是在我们的实验中发现使用100uL进行复溶并不容易,我们的样品基本是血液、尿液、器官等。
    前处理后,使用100uL进行复溶后,不太容易转移到样品瓶中进样,特别是有时还要复溶后进行离心或过膜进行净化。
    想问一下,使用少量溶剂或洗脱液进行复溶怎么操作?是不是有特殊的仪器?还是有什么技巧?
    谢谢!!!
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  • 雾非雾

    第1楼2016/01/13

    应助达人

    样品蒸干后复溶操作的难易这个要根据您的复溶体积来判断,也就是说比如是用旋蒸蒸干的,因为旋蒸瓶的内表面积比较大,要想用1ml以下的溶剂体积复溶且要完全(也就是保证数据的准确性)这个比较困难,但是如果用氮吹浓缩的,因为氮吹浓缩时是渐渐集中于底部那一小点上,这样小体积定容相对容易些。不过用100uL的溶剂或洗脱液进行复溶,感觉要想完全可能也不是太好操作,我们复溶时用超声波助溶效果不错,您可以试试。

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  • hujiangtao

    第2楼2016/01/13

    应助达人

    100ul确实有点少

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  • ie4680180

    第3楼2016/01/13

    应助达人

    为什么不用1毫升呢?呵呵

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  • cinderella2012

    第4楼2016/01/13

    用内插管啊

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  • 小磊1723

    第5楼2016/01/13

    我们用的标准都是1mL复溶的

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  • anyizhimin

    第6楼2016/01/14

    生物样品由于来源有限,样品量非常小,所以前处理的样品使用量也很小(我们多用10~50uL,蛋白沉淀),如果是液液萃取或固相萃取也不过用100~200uL,所以不能大体积复溶,否则样品被稀释,降低了检测灵敏度。
    因此我们用到复溶时,会根据待测化合物的性质,配制不同比例的甲醇-水溶液或乙腈-水溶液进行复溶,并用甲酸、乙酸、氨水等调节酸碱度,偶尔也会加入丙酮、异丙醇等助溶,一般采用涡旋震荡溶解。当使用高比例有机溶剂时要注意溶剂效应(尤其是乙腈)及溶剂挥发引发的浓度改变(数百个样品长时间序列进样,通常要有内标);实在溶解效果不佳,会超声溶解或适当增大溶解液体积至200~300uL。、

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  • feier86

    第7楼2016/01/14

    生物样品前处理后一般用EP管在氮吹仪吹干,100-200ul复溶,然后高速离心取上清到内插管再放进进样瓶。

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  • guten

    第8楼2016/01/20

    谢谢!

    雾非雾(mcds) 发表:样品蒸干后复溶操作的难易这个要根据您的复溶体积来判断,也就是说比如是用旋蒸蒸干的,因为旋蒸瓶的内表面积比较大,要想用1ml以下的溶剂体积复溶且要完全(也就是保证数据的准确性)这个比较困难,但是如果用氮吹浓缩的,因为氮吹浓缩时是渐渐集中于底部那一小点上,这样小体积定容相对容易些。不过用100uL的溶剂或洗脱液进行复溶,感觉要想完全可能也不是太好操作,我们复溶时用超声波助溶效果不错,您可以试试。

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  • guten

    第9楼2016/01/20

    谢谢!
    就像您回复里说的:“样品被稀释,降低了检测灵敏度。”

    anyizhimin(anyizhimin) 发表:生物样品由于来源有限,样品量非常小,所以前处理的样品使用量也很小(我们多用10~50uL,蛋白沉淀),如果是液液萃取或固相萃取也不过用100~200uL,所以不能大体积复溶,否则样品被稀释,降低了检测灵敏度。
    因此我们用到复溶时,会根据待测化合物的性质,配制不同比例的甲醇-水溶液或乙腈-水溶液进行复溶,并用甲酸、乙酸、氨水等调节酸碱度,偶尔也会加入丙酮、异丙醇等助溶,一般采用涡旋震荡溶解。当使用高比例有机溶剂时要注意溶剂效应(尤其是乙腈)及溶剂挥发引发的浓度改变(数百个样品长时间序列进样,通常要有内标);实在溶解效果不佳,会超声溶解或适当增大溶解液体积至200~300uL。、

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  • guten

    第10楼2016/01/20

    谢谢!

    anyizhimin(anyizhimin) 发表:生物样品由于来源有限,样品量非常小,所以前处理的样品使用量也很小(我们多用10~50uL,蛋白沉淀),如果是液液萃取或固相萃取也不过用100~200uL,所以不能大体积复溶,否则样品被稀释,降低了检测灵敏度。
    因此我们用到复溶时,会根据待测化合物的性质,配制不同比例的甲醇-水溶液或乙腈-水溶液进行复溶,并用甲酸、乙酸、氨水等调节酸碱度,偶尔也会加入丙酮、异丙醇等助溶,一般采用涡旋震荡溶解。当使用高比例有机溶剂时要注意溶剂效应(尤其是乙腈)及溶剂挥发引发的浓度改变(数百个样品长时间序列进样,通常要有内标);实在溶解效果不佳,会超声溶解或适当增大溶解液体积至200~300uL。、

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