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新手咨询凝胶渗透色谱流动相问题

凝胶色谱(GPC)

  • 各位版友,小弟最近在做凝胶色谱时遇到几个问题,请大家帮忙指导下,感激不尽。
    具体问题:在采用RID+3根凝胶柱(THF用)测定游离酸样品时,发现若采用纯的THF作流动相,浓度-响应不成线性,如:样品浓度5mg/ml时,峰高25mv左右,稀释一定倍数之后基本不成峰形,且不成线性(峰成台阶型)。然后向流动相中加入0.05%冰乙酸后,峰形改善的同时线性能做到0.999,但是主峰与附近峰分离度减小无法分离。请教有木有其他办法或者添加其他试剂改善浓度-响应不成比例的问题呢?或者说四氢呋喃系统一般能加什么试剂改善峰形及响应?谢谢~
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  • ntysg

    第1楼2016/02/17

    首先是column的选型,其次是样品分子量与浓度对应关系有要求的

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  • 小不董

    第2楼2016/02/23

    应助达人

    至少你有两个问题,第一,5mg/ml浓度可能有点大了,有可能团聚,你可以比较下更低浓度的出峰时间,若出峰时间比低浓度的早,基本可以证实这点。
    第二,由于你说了样品是酸性的,所以流动相需要调节pH值,你的实验已经证明,至于加多少浓度,这需要你去摸索,找到合适的盐浓度。
    另你说的线性达到0.999是什么意思?什么和什么的线性关系?

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  • 礼安

    第3楼2016/02/23

    目前手头买了赛分和waters的色谱柱,浓度直接参考的EP暂时还未进行考察。

    ntysg(ntysg) 发表:首先是column的选型,其次是样品分子量与浓度对应关系有要求的

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  • 礼安

    第4楼2016/02/23

    目前样品浓度参照的EP,下一步先证实下这个问题;就是加酸的这个问题比较困扰,改善峰行使主峰保留时间前移。这里的线性是指加了酸之后做线性的话相关系数能做到3个9,如果不加酸做不起线性哦。

    小不董(doxw0323) 发表:至少你有两个问题,第一,5mg/ml浓度可能有点大了,有可能团聚,你可以比较下更低浓度的出峰时间,若出峰时间比低浓度的早,基本可以证实这点。
    第二,由于你说了样品是酸性的,所以流动相需要调节pH值,你的实验已经证明,至于加多少浓度,这需要你去摸索,找到合适的盐浓度。
    另你说的线性达到0.999是什么意思?什么和什么的线性关系?

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  • 小不董

    第5楼2016/03/07

    应助达人

    你还是没回答问题,你说的线性是GPC关于分子量的吗?这是需要标准样品的,标准样品和样品是一样的吗?

    礼安(v2827415) 发表: 目前样品浓度参照的EP,下一步先证实下这个问题;就是加酸的这个问题比较困扰,改善峰行使主峰保留时间前移。这里的线性是指加了酸之后做线性的话相关系数能做到3个9,如果不加酸做不起线性哦。

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