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色谱柱的安装需什么技巧?所谓的死体积怎么测定呢?

happytiankong1

2016/04/06

色谱柱安装技巧不多，只要接头和柱头匹配，确实拧紧不漏就可以了，但也要注意不要拧得太紧以至于损伤螺纹。所谓死体积就是完全不保留的物质出峰时从进样到流过色谱柱的总体积，一般用极性非常强的尿嘧啶的出峰来测定。死体积包括柱体积(色谱柱内溶剂能占据的空腔体积)和柱外体积两部分。从厂商这里买到色谱柱，柱体积已经是固定了，你能尽量避免减少的是柱外体积。进样器内死体积、毛细管长度、毛细管和色谱柱连接紧凑与否，保护柱或在线滤器产生的死体积大小，都对这个有影响。样品在柱内，除扩散外，还有和填料作用引起的组分分离;但样品在柱外，那就只有扩散这个使柱效下降的因素了。
所以，要取得好的分离效率，柱外体积应该是越小越好。峰有时候前延，有时候拖尾，一般不是色谱柱的问题，应该是样品和色谱柱填料的作用问题，可以说如果色谱柱类型选择没问题，关键就是色谱条件的选择。包括进样量、样品溶剂、流动相组成(包括添加剂)、流动相pH以及柱温，都对峰形有影响。另外测定分子量较大的多肽，用样品老化平衡色谱柱很重要，分子量越大的物质，需要平衡时间越长。如果柱子没平衡好，峰形也可能会不正常。所以最好把你具体的测定条件也列一下，也便于有针对性的分析原因。

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wsy18

第1楼2016/04/07

死体积的问题值得关注。

0

happytiankong1

第2楼2016/04/07

死体积跟柱效有关，死体积越低，影响越小
wsy18(wsy18) 发表:死体积的问题值得关注。

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wsy18

第3楼2016/04/07

所以必须重视下。
happytiankong1(happytiankong1) 发表:死体积跟柱效有关，死体积越低，影响越小

0

wsy18

第4楼2016/04/07

所以必须重视下。
happytiankong1(happytiankong1) 发表:死体积跟柱效有关，死体积越低，影响越小

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wsy18

第5楼2016/04/07

所以必须重视下。
happytiankong1(happytiankong1) 发表:死体积跟柱效有关，死体积越低，影响越小

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