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试用月旭超高压液相柱对20种游离氨基酸的分析

试剂/耗材采购

  • 首先非常感谢月旭公司提供的超高压液相柱免费试用机会，这是本人第一次使用超高压液相柱，感觉超高压液相柱相比于普通液相柱各个方面都很棒。


    这里简单谈谈我试用月旭这款超高压液相色谱柱的情况，本来是准备做样品中有机酸分析，后因有机酸标品未到货，故而尝试20种游离氨基酸的分析，这里仅仅只是做了标品的对照。仪器为Agilent 1290 Infinity，实验条件如下：以2, 4 -二硝基氟苯(DNFB)作衍生化试剂，0.015 mol/L磷酸氢二钠和磷酸二氢钾缓冲液（pH=7.50）和50%乙腈水溶液为流动相，采用反相HPLC法分析测定。得到的色谱图如下图所示，按保留时间排序，每个色谱峰对应的组分分别为：天门冬氨酸，谷氨酸，天门冬酰胺，丝氨酸，精氨酸，甘氨酸，苏氨酸，脯氨酸，丙氨酸，缬氨酸，甲硫氨酸，异亮氨酸，胱氨酸，亮氨酸，色氨酸，苯丙氨酸，组氨酸，半胱氨酸，赖氨酸，酪氨酸，其中最强峰为溶剂峰。

    条件： Welch Ultimate UHPLC LP-C18 50×4.60mm 1.8micron；梯度洗脱；柱温25℃；DAD检测器，检测波长：360 nm；进样量2 μL。

    条件：phenomenexSynergi Hydro-RP 250×4.60mm 4micron；梯度洗脱；柱温25℃；DAD检测器，检测波长：360 nm；进样量10 μL。

    从试用效果简单谈下我的感想，从比较情况来看，这款超高压液相柱还是非常不错的，细说主要是以下几点：（一）Welch超高压液相柱相比普通C18柱不仅提高了分离速度，样品保留时间由原来的50min缩减至13min，分析效率得到极大的提高；（二）相比于普通液相柱，Welch超高压液相柱具有较高的灵敏度，分析样品的响应信号有明显的提高，不仅得到较好的峰形，无拖尾现象，并且具有更好的重现性；（三）Welch超高压液相柱的使用，不仅减少流动相中有机溶剂的使用，缩短了分离时间且分析结果更加精确。
    当然，测试的过程中也出现一个小插曲，就是液相柱在分析完样品后柱压有明显升高，排查后为柱子堵塞，连续冲了2晚终于柱压正常，这说明超高压液相柱极易堵塞，建议接预柱使用。
    最后，对于这次月旭超高压液相柱的试用非常满意，感谢月旭公司能够提供这样的机会。
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  • samanthalas

    第1楼2016/04/27

    感谢楼主分享！

    20种氨基酸的分离，还要衍生，又要走梯度，属于难度比较大的实验哦！
    有以下几个问题要请教：
    1、由于时间大大缩短，那么梯度条件是如何设置的，中间有摸索的经历吗？
    2、与原来所使用的柱子相比，出峰顺序有没有变化，对你们来说允许这样的变化吗？

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  • samanthalas

    第2楼2016/04/27

    对了， 楼主也存在把柱子规格写错哦！
    超高压柱， 必须是1.8微米哈！ 你写的4。 不可能是4哈！

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  • niminty

    第3楼2016/04/27

    这个方法确实比较复杂。（1）这个梯度当时也是用普通液相柱做得相对比较成熟的，换上超高压液相柱后进行了相应方法转换，调整了pH条件，后来慢慢调整摸索出来，有些峰还需要再探究下。（2）这个变化对我们来说完全是没有问题的，至于出峰的顺序问题我后续还会继续去研究。感谢您的提问！

    samanthalas(samanthalas) 发表:感谢楼主分享！

    20种氨基酸的分离，还要衍生，又要走梯度，属于难度比较大的实验哦！
    有以下几个问题要请教：
    1、由于时间大大缩短，那么梯度条件是如何设置的，中间有摸索的经历吗？
    2、与原来所使用的柱子相比，出峰顺序有没有变化，对你们来说允许这样的变化吗？

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  • niminty

    第4楼2016/04/27

    不好意思，写错了，我已经更正过来！

    samanthalas(samanthalas) 发表:对了， 楼主也存在把柱子规格写错哦！
    超高压柱， 必须是1.8微米哈！ 你写的4。 不可能是4哈！

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  • samanthalas

    第5楼2016/04/27

    梯度条件。 具体是怎么相应转化的呢？ 说的好神秘啊？

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  • xue2009

    第6楼2016/04/28

    2, 4 -二硝基氟苯(DNFB)作衍生化试剂。请问楼主这个衍生试剂做胱氨酸的效果如何？我们知道采用PITC法做胱氨酸的效果不理想，图中哪个峰是胱氨酸的峰呢？

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  • xue2009

    第7楼2016/04/28

    2, 4 -二硝基氟苯(DNFB)作衍生化试剂。请问楼主这个衍生试剂做胱氨酸的效果如何？我们知道采用PITC法做胱氨酸的效果不理想，图中哪个峰是胱氨酸的峰呢？

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  • xue2009

    第8楼2016/04/28

    楼主的仪器的仪器是agilent的仪器吧？agilent有一个转化软件可以将色谱条件在普通柱子和UHPLC柱之间转化，非常方便。

    samanthalas(samanthalas) 发表:对了， 楼主也存在把柱子规格写错哦！
    超高压柱， 必须是1.8微米哈！ 你写的4。 不可能是4哈！

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  • xue2009

    第9楼2016/04/28

    楼主提到的柱子的柱压升高的问题。这个是由于衍生试剂的影响，毕竟衍生试剂是大大过量的。这种情况建议楼主可以用用月旭的boltimate核壳色谱柱，这种柱子色谱分离性能跟UHPLC色谱柱一致，但是压力却只有UHPLC柱的一半，且因为填料内部是实心核，所以不容易堵。

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  • 牛二

    第10楼2016/04/28

    应助达人

    用液相的版友有福利咯 ，， 欢迎大家使用后发表反馈报告

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