仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

welch月旭核壳小柱在8种合成着色剂上的方法优化分享

试剂/耗材采购

  • 合成着色剂是一个食品实验室常常开展的检测项目,目前的检测方法也比较的成熟,但是也有仪器耗时长,分离不理想的情况。尤其是对于硬件配置不是很多的实验室而言,如果能在仪器跑样的时间节约一半的时间势必会极大的提高仪器的利用效率。
    出于效率改进,我们在色谱柱上开始动动想法,首先来分享一张常规C18色谱柱的色谱图:

    图中为普通的C18 25cm*4.6mm 5μm 色谱柱图,流动相为甲醇-乙酸铵体系
    可以看到分离的难点为柠檬黄与新红之间resolution是不足1.5,容易造成误判,分析时间为25min
    为了解决分离度与与分析时间的问题,我们尝试用小柱进行方法开发
    在此感谢welch 月旭提供的免费试用,先看看色谱柱信息:月旭LP-C18 2.1*50mm core-shell 2.7μ welch PN:965-04010
    首先我们要解决几个问题:
    a.柱压的问题:我们都知道一般粒径越细的柱子柱压会很高,液相系统能不能耐受,我现在安捷伦1200型四元低压系统液相系统,是达不到UPLC的要求,月旭LP-C18 2.1*50mm core-shell 2.7μ 这款柱子在0.4mL/min 、柱温40、甲醇流动相体系压力表现为115bar ,50%左右甲醇极大压力135,乙腈系统压力就更不用说了,普通液相都能耐受。

    b.死体积的问题:如果你是UPLC系统就忽略此条,对于四元低压系统,需要在泵后到柱前换上细内径的管、尤其注意预混器死体积的影响
    c.进样体积与检出限之间的取舍:大体积进样可能色谱柱过载,产生严重的溶剂效应,配制样品的溶液尽量与起始流动相一致,并且要降低进样体积,不必过于担心检测限,小柱的峰宽普遍比较小,控制好死体积的影响都会得到不错的峰高
    d.出峰过快的问题:避免在3倍死时间内出峰,杂峰干扰能让你崩溃
    好了,现在看看5cm小柱用普通四元低压系统的优化结果:

    特点就是:10分钟结束战斗!新红与柠檬黄完全的基线分离(新红标准浓度配制较低),死时间约0.4min
    梯度条件如图:

    柱温:低柱温对于弱保留物分析有利,为了保证分离度改为25℃
    流动相:柠檬黄、新红对于有机比例很敏感,乙腈洗脱强度太高不利于微调,所以只能用甲醇体系,起始有机相比例控制好,后期给予4min以上的再平衡时间很重要
    检测波长:亮蓝采用变换检测波长为595nm极大的降低了检出限值
    进样量:进样体积约3μL左右峰高等同于25cm*4.6mm 5μm 柱进样10μL
    总结特点:节约仪器时间、节约流动相、改善了分离度,本人用的是四元低压系统,死体积溶剂延迟等问题还是会增加梯度调节难度和增加样品扩散,相信UPLC或拌UPLC的二元高压会有更出色的表现
  • 该帖子已被版主-vm88加10积分,加2经验;加分理由:原创有奖
    +关注 私聊
  • 牛二

    第1楼2016/04/28

    应助达人

    这个要多做几组平行实验?

0
    +关注 私聊
  • samanthalas

    第2楼2016/04/28

    真是高质量的文章!
    太感谢楼主的分享了!
    非常详细! 图文并茂, 对实验的操作细节都有非常细致的阐述.
    非常棒!

0
    +关注 私聊
  • samanthalas

    第3楼2016/04/28

    这个是做的标准品吧?

0
    +关注 私聊
  • vigehsu

    第4楼2016/04/28

    时间有限,没有写上样品测试

    samanthalas(samanthalas) 发表:这个是做的标准品吧?

0
    +关注 私聊
  • samanthalas

    第5楼2016/04/28

    哦! 样品的实验做了, 但是没有时间发表到帖子里对吧?

    vigehsu(vigehsu) 发表: 时间有限,没有写上样品测试

0
    +关注 私聊
  • xue2009

    第6楼2016/04/28

    楼主的帖子写非常好。赞一个。有几个疑问向楼主请教一下。
    1,柠檬黄与新红在普通C18柱的分离度低,请问楼主有优化过液相条件吗?还是说在常规的柱子优化过液相色谱条件,仍然无法使柠檬黄与新红达到有效的分离?如果是这样的话,那么说明你使用的这根常规液相色谱柱不适合柠檬黄与新红的分离。
    2,楼主使用月旭LP-C18 2.1*50mm core-shell 2.7μ色谱柱,用的流速是0.4ml/min。请问有增大流速进行实验吗?毕竟core-shell 色谱柱在高的流速下才能显现出他的优势,还是说增大流速后峰就挤到一起了?
    3,楼主将常规柱子的梯度方法转移到核壳柱子的方法,是怎么进行转换的?是自己根据公式计算还是使用了什么软件?比如梯度条件的转换,流速的转换,进样量的转换。
    4,楼主是做什么基质里面的色素?前处理是怎么进行的?据我们的经验来看,色素的检测前处理是关键。请问楼主是利用聚酰胺填料固相萃取小柱进行前处理的吗?

1
    +关注 私聊
  • vm88

    第7楼2016/04/29

    色素太多对柱子有影响吗?

0
    +关注 私聊
  • samanthalas

    第8楼2016/04/29

    请问楼主. 这种梯度和进样量乃至流速的改动. 对于您来说, 还算不算是遵从国标呢?
    您单位允许这样的改动吗? 实验结果承认吗?

0
    +关注 私聊
  • peijiaoxia

    第9楼2016/04/29

    换了细内径的管以后再做其他项目的时候会有影响吗

0
    +关注 私聊
  • vigehsu

    第10楼2016/05/05


    不好意思,补发一个阴性样品图谱

    samanthalas(samanthalas) 发表: 哦! 样品的实验做了, 但是没有时间发表到帖子里对吧?

0
查看更多
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...