我是风儿
第1楼2016/07/16
1. 方法原理
茶叶样品加入乙腈超声提取,固相萃取柱净化,用超高效液相色谱-串联质谱仪检测,外标法定量。方法定量检测限(LOQ)为0.06mg/kg。
这里大家可能会有一个疑问,水明明比乙腈对高氯酸盐的溶解性强,为什么不用水做提取剂而是用乙腈呢?这是因为茶叶中的组分较为复杂,水的极性较强,作提取剂时可萃取出较多的非目标组分,在检测时对目标物形成比较大的干扰,而乙腈萃取出的提取液则要干净很多,且提取效果与水相当,因此方法中选用乙腈作为提取剂。
2. 标准品
高氯酸钠(纯度99%以上)。高氯酸盐是一类含有高氯酸根(ClO4-)的盐,包含多种化合物,最终的计算结果以高氯酸钠计。
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第2楼2016/07/16
3. 测定步骤
准确称取粉碎的茶叶样品2 g(精确到0.1mg)于50 ml塑料离心管中,准确加入10 mL乙腈(色谱纯),混匀,超声提取30 min,10000 r/min高速离心5 min;取上清液2 mL,转入3mL高氯酸盐专用固相萃取柱中(先以10 mL乙腈活化后使用),收集流出液,并以1 mL乙腈洗脱,合并流出液和洗脱液,用乙腈定容至4 mL,涡旋混匀,过0.22 μm有机滤膜待测。
4. 测定条件
(1)色谱条件
色谱柱:Phenomenex,synergi,4μm,MAX-RP,150×2.0mm;柱温:40℃;进样量:2 μL;流动相:0.02%乙酸溶液、甲醇梯度洗脱,洗脱条件见表1。
表1 流动相梯度洗脱条件
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第4楼2016/07/16
6. 注意事项
茶叶中高氯酸盐的检测方法操作过程虽然比较简单,但如果在操作中忽视一些小细节,可能会造成整个实验的失败。笔者根据自身实践经验,将实验过程中需注意的事项整理如下,供大家参考。
(1)本项目过程空白有一定本底值(一般在0.01~0.03 mg /kg左右),在实验中必须做过程空白试验,以扣除空白本底。
(2)由于洗涤剂中含有大量的高氯酸盐,且自来水中也很有可能存在少量的高氯酸盐,因此实验过程中所用的器皿均需用乙腈冲洗后再使用。为避免冲洗不彻底带入本底,笔者建议最好是用新的器皿。
(3)高浓度的高氯酸钠在乙腈中难溶解完全,因此高浓度标准溶液用水作溶剂,低浓度标准溶液再用乙腈稀释。
(4)高氯酸盐专用小柱存在微量的本底,在加入样品提取液前,需先用10mL的乙腈淋洗小柱,一是起活化小柱的作用,二是可以消除本底。
(5)茶叶样品成分比较复杂,在提取时有很多非目标组分也随之一起提取出来,在仪器检测过程中,这些杂质可能会残留在色谱柱中影响色谱柱的性能,还会影响后面样品的检测值,所以液相洗脱条件最好是采用梯度洗脱,将色谱柱中的残留物冲洗干净。
(6)实验室中如果有其他检测项目用到高氯酸,一定要注意实验环境中高氯酸盐的污染问题,最好是将高氯酸盐项目所用的耗材分开保存和使用,以免交叉污染。
(7)在仪器上开始样品序列运行前,先走空针测试一下流动相以及仪器系统有没有被污染,接着再走试剂空白,以确定所用试剂没有被污染,在确定了流动相、仪器、试剂均正常后,再运行样品序列。