SPE400全自动机械臂固相萃取仪应用之呕吐毒素

1 前言

呕吐毒素主体成分为DON（脱氧雪腐镰刀菌烯醇），属于单端孢霉烯族化合物，在自然界中广泛存在，在食品中常见的真菌毒素。呕吐毒素具有很高的细胞毒素及免疫抑制性质，对人类的健康构成很大的威胁。世界各国对食品和饲料中的呕吐毒素都有严格的限量标准。

2 实验部分

2.1 实验原理

《GBT 23503-2009 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》

2.2 试剂与仪器设备

除非另有规定，仅使用分析纯试剂、蒸馏水。
2.2.1 试剂

甲醇(CH3OH)：色谱纯；乙腈：色谱纯；脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品：纯度 ≧ 98 %；脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备液：准确称取一定量的脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品，用甲醇溶解，配成0.1 mg/ml的标准储备液，在-20 ℃保存，可使用3个月；脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准工作液：根据使用需要，准确吸取一定量的脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备液，用流动相稀释，分别配成相当于0.1 μg/ml、0.2 μg/ml、0.5 μg/ml、1.0 μg/ml、2.0 μg/ml、5.0 μg/ml的标准溶液，4 ℃保存，可以使用7天；脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱；玻璃纤维滤纸：直径11 cm，孔径1.5 μm。

2.2.2 仪器和设备

SPE 400 全自动机械臂固相萃取仪（济南海能）；HN200多功能氮吹仪（济南海能）；LC7000高效液相色谱仪(济南海能)；天平；均质机；离心机量筒或移液管；微量移液器100ul-1000ul；10ml/20ml注射器；空气压力泵。

2.3实验前处理

2.3.1 试样制备与提取

称取25 g (精确到0.01g)面粉试样于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，转移至均质杯中，高速搅拌2 min。定量滤纸过滤后以玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清，收集滤液于干净的容器中。

2.3.2 活化

将免疫亲和柱置于SPE 400色谱柱位置，仪器自动准确移取超纯水3毫升注入色谱柱，流速1滴/s，弃去全部流出液。
2.3.3 上样与淋洗
仪器准确移取滤液2.0 ml，根据设置参数，使溶液以约1滴/s的流速通过免疫亲和柱，直至空气进入亲和柱中。用5 ml水淋洗免疫亲和柱，流速约为1滴/s~2滴/s，直至空气进人亲和柱中，弃去全部流出液，抽干小柱。

2.3.4 洗脱

准确加入1.0 ml甲醇洗脱，流速约为1滴/s，收集全部洗脱液于干净的玻璃试管中，HPLC测定。

2.4 固相色谱仪步骤及参数设定

2.4.1 步骤：活化—上样—淋洗—洗脱

2.4.2 参数：

活化：

上样：

淋洗：

洗脱：

2.5 色谱条件

色谱柱：C18柱，150 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：甲醇-水 (20+80)；检测器：紫外检测器；流速0.8 ml/min；柱温：35 ℃；波长218 nm；进样量20 μl。