化妆品中15种喹诺酮类药物的检测——UPLC-MS/MS法解决方案

微雨燕双飞

2016/09/05

私聊

厂商论坛

喹诺酮类药物是一类合成抗菌药物，在我国的化妆品卫生规范中属于严禁添加的药物。由于这类药物见效快、成本低，还是有厂商在祛痘、除螨、抗粉刺的化妆品中违禁添加喹诺酮类药物，有个别厂商甚至采取添加少量多种的办法逃避监管。
目前，国内外对食品中喹诺酮类药物残留的检测研究较多，也较为成熟。检测方法多为高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、酶联免疫法等，对于化妆品中喹诺酮类药物的分析研究较少，仅有的不是检测的目标物种类少就是检测的样品基质种类少，难以适应化妆品安全监管的需要。
化妆品根据用途和功效不同，基质差异也较大，其主要成分有植物油脂、动物油脂、脂肪醇类、粉质原料、表面活性剂和防腐剂。检测化妆品中多种喹诺酮类药物，不仅要求样品提取和净化方法要具有普适性和高效性，还要求检测方法具有良好的选择性和灵敏度。
方法优势：
迪马科技开发的《化妆品中15种喹诺酮类药物的检测》采用固相萃取-UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS/MS法测定化妆品中15种喹诺酮类药物，根据基质理化性质分别采用水、甲酸乙腈等溶剂提取，采用混合型阳离子交换固相萃取柱净化样品，通过UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS/MS检测；方法定量限是10.0 μg/kg。本方案前处理步骤简便、操作简单、净化效果好，重现性好，回收率高。
以下为详细解决方案，敬请参考！

化妆品中15种喹诺酮类药物的检测——UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS/MS法

1、适用范围
本方案适用于爽肤水、乳液、面霜、BB霜、洗面奶、祛痘护肤品等化妆品中氧氟沙星、依诺沙星、培氟沙星、奥比沙星、达氟沙星、氟罗沙星、莫西沙星、恩诺沙星、环丙沙星、司帕沙星、双氟沙星、丹诺沙星、沙拉沙星、洛美沙星、马波沙星等15种喹诺酮类药物的检测；本方法定量限是10.0 μg/kg。
2、溶液类（爽肤水等）
2.1提取
取样品0.5 g，加入5 mL水，涡旋混合1 min，待净化。
2.2 净化——ProElut PXC 500 mg/12 mL（Cat#：68207）

a活化：	5 mL乙醇、5 mL水活化；
b上样：	加入待净化液，弃去流出液；
c淋洗：	加入5 mL水、5 mL乙醇，弃去流出液；
d洗脱：	加入10 mL 20%氨水乙醇，收集流出液；加10 mL乙醇，混匀，40 ℃减压浓缩至干，用初始流动相定容至1 mL，混匀，过0.22 μm微孔滤膜，供[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS分析。

备注：同方法制备基质匹配标准溶液。
3、乳液、果冻状样品
3.1提取
取样品0.5 g，加入10 mL 2%甲酸乙腈，振荡2 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液，取5.0 mL上清液，待净化。
3.2 净化——ProElut PXC 500 mg/12 mL（Cat#：68207）

a活化：	5 mL乙醇活化；
b上样：	加入待净化液，弃去流出液；
c淋洗：	加入10 mL乙醇，弃去流出液；
d洗脱：	加入10 mL 20%氨水乙醇，收集流出液；加10 mL乙醇，混匀，40 ℃减压浓缩至干，用初始流动相定容至1 mL，混匀，过0.22 μm微孔滤膜，供[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS分析。

备注：同方法制备基质匹配标准溶液。
4、BB霜、洗面奶
4.1提取
取样品0.5 g，加2 mL水，振摇使之分散，加10 mL 2%甲酸乙腈，振摇30 s，加4.0 g氯化钠，振摇2 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液于20 mL具塞刻度试管中，向下层残渣中继续加10 mL 2%甲酸乙腈，按上述方法重复提取一次，合并2次上清液，用2%甲酸乙腈定容至20 mL，混匀，取10 mL上清液，待净化。
4.2 净化——ProElut PXC 500 mg/12 mL（Cat#：68207）

a活化：	5 mL乙醇活化；
b上样：	加入待净化液，弃去流出液；
c淋洗：	加入10 mL乙醇，弃去流出液；
d洗脱：	加入10 mL 20%氨水乙醇，收集流出液；加10 mL乙醇，混匀，40 ℃减压浓缩至干，用初始流动相定容至1 mL，混匀，过0.22 μm微孔滤膜，供[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS分析。

备注：同方法制备基质匹配标准溶液。
5、分析条件
5.1 UPLC条件
色谱柱：Leapsil C18，100 × 2.1 mm，2.7 μm (Cat#：86005)
流速：0.3 mL/min 进样量：5 μL 柱温：35 ℃
流动相： A：0.1%甲酸水 B：乙腈
梯度设置

时间/Min.	0	4.5	5.5	7	7.5	15
A（%）	80	80	0	0	80	80
B（%）	20	20	100	100	20	20

5.2质谱条件

电离模式：ESI	扫描方式：正离子扫描
检测方式：多反应监测	电喷雾电压：5500 V
雾化气压力：50 psi	辅助气压力：50 psi
气帘气压力：20 psi	离子源温度：500 ℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

药物名称	定性离子对（m/z） (母离子/子离子)	定量离子对（m/z） (母离子/子离子)	碰撞气能量/eV	去簇电压 /V
马波沙星	363.2/320.2	363.2/320.2	24	82
	363.2/277.4		24
沙拉沙星	386.2/342.2	386.2/342.2	24	92
	386.2/299.2		35
双氟沙星	400.2/356.2	400.2/356.2	27	100
	400.2/299.3		37
恩诺沙星	360.3/316.1	360.3/316.1	26	80
	360.3/245.2		34
洛美沙星	352.3/265.1	352.3/265.1	30	93
	352.3/308.3		23
氧氟沙星	362.3/318.3	362.3/318.3	25	90
	362.3/261.2		35
依诺沙星	321.3/303.2	321.3/303.2	26	79
	321.3/232.1		45
培氟沙星	334.2/316.1	334.2/316.1	25	84
	334.2/290.2		24
奥比沙星	396.3/352.2	396.3/352.2	24	97
	396.3/295.2		32
达氟沙星	358.4/340.2	358.4/340.2	28	86
	358.4/255.4		50
氟罗沙星	370.4/326.2	370.4/326.2	24	100
	370.4/269.2		36
莫西沙星	402.4/384.1	402.4/384.1	28	85
	402.4/364.2		35
环丙沙星	332.2/288.2	332.2/288.2	23	80
	332.2/245.2		30
司帕沙星	393.2/349.2	393.2/349.2	27	110
	393.2/292.1		34
丹诺沙星	358.3/314.1	358.3/314.1	24	97
	358.3/283.4		30

6、添加回收结果

化妆品中15种喹诺酮类药物(添加水平10.0 μg/kg)检测添加回收结果

基质	爽肤水	乳液	洗面奶	腋露	祛痘面膜	BB霜
氧氟沙星	101.20%	84.40%	96.91%	97.20%	100.40%	95.20%
依诺沙星	96.00%	102.40%	115.96%	80.30%	89.60%	92.80%
培氟沙星	92.40%	92.40%	85.17%	101.32%	62.80%	83.20%
奥比沙星	82.80%	96.40%	107.21%	82.58%	90.40%	88.80%
达氟沙星	78.80%	94.80%	81.31%	164.09%	63.20%	76.80%
氟罗沙星	91.60%	105.60%	97.72%	95.77%	100.80%	101.60%
莫西沙星	104.00%	103.60%	101.75%	99.11%	102.80%	64.80%
恩诺沙星	106.80%	108.40%	103.10%	118.64%	83.60%	89.60%
环丙沙星	86.40%	115.60%	89.81%	99.53%	95.60%	78.00%
司帕沙星	98.00%	98.40%	78.44%	74.91%	79.20%	87.20%
双氟沙星	88.40%	90.00%	92.17%	105.21%	92.80%	94.00%
丹诺沙星	116.80%	122.80%	96.82%	91.39%	88.40%	84.00%
沙拉沙星	88.40%	78.80%	69.43%	96.74%	105.20%	85.20%
洛美沙星	99.60%	90.00%	98.14%	70.91%	99.60%	96.00%
马波沙星	82.00%	109.20%	90.27%	115.77%	82.80%	110.80%

15种喹诺酮类25 μg/L MRM色谱图

马波沙星25 μg /L XIC色谱图

依诺沙星25 μg/L XIC色谱图

氟罗沙星25 μg/L XIC色谱图

氧氟沙星25 μg/L XIC色谱图

培氟沙星25 μg/L XIC色谱图

环丙沙星25 μg/L XIC色谱图

洛美沙星25 μg/L XIC色谱图

丹诺沙星25 μg/L XIC色谱图

达氟沙星25 μg/L XIC色谱图

恩诺沙星25 μg/L XIC色谱图

奥比沙星25 μg/L XIC色谱图

沙拉沙星25 μg/L XIC色谱图

双氟沙星25 μg/L XIC色谱图

司帕沙星25 μg/L XIC色谱图

莫西沙星25 μg/L XIC色谱图

化妆品中15种喹诺酮类药物的检测——UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS/MS法相关产品信息：

货号	名称	规格
样品前处理
68207	ProElut PXC	500 mg/12 mL 20/pk
244358	12管防交叉污染真空SPE萃取装置	12位
4806	考克(控制流量)	15/pk
99011	真空/正压两用泵，无油	1/pk
99013	抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞)	1/pk
30039	FitMax针头式过滤器 Nylon	13 mm,0.22 μm 100/pk
30040	FitMax针头式过滤器 Nylon	13 mm,0.45 μm 100/pk
标准品
50P-C15717000	氧氟沙星	100 mg
50P-C13166950	依诺沙星	100 mg
50P-C15905000	培氟沙星磺酸盐	100 mg
50P-C15742000	奥比沙星	100 mg
50P-C11960500	甲磺酸达氟沙星	100 mg
50P-C13658000	氟罗沙星	100 mg
83J-Y0000703	莫西沙星盐酸盐	110 mg
50P-C13170000	恩诺沙星	100 mg
50D-250693-5G	环丙沙星	5 g
50P-C16972650	司帕沙星	100 mg
50P-C12627000	双氟沙星盐酸盐	100 mg
50-D132445-100MG	丹诺沙星	100 mg
50D-405234-10MG	沙拉沙星	10 mg
50P-C14646000	洛美沙星盐酸盐	100 mg
55-34039-100MG	马波沙星	100 mg
色谱柱及保护柱
86005	Leapsil C18	100 × 2.1 mm，2.7 μm
HPLC溶剂Ÿ缓冲盐Ÿ离子对试剂
50101	乙腈 HPLC级	4 L
50108	乙醇 HPLC级	4 L
50144	甲酸 HPLC级	50 mL
通用色谱产品
52401B	瓶架/蓝色（现货）	50孔
52401A	瓶架/白色（现货）	50孔
1034	样品瓶（棕色/螺纹）	2 mL, 100/pk
1035	样品瓶盖/含垫（已经组装）	100/pk
H80465	HPLC 进样针	25 μL