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琼脂糖凝胶电泳注意事项
lijing320323
2017/01/25
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电泳仪
1.体系配制时候最关键的几个试剂一定要确定它们还有效、或者还没被污染:引物,酶,超纯水。这些东西最好自己收好,写上个人的名字放好,冰盒上记得带上橡皮筋,这样就不会因为别人翻冰箱时候把你的冰盒碰散了,试剂都碰掉。否则,你的试剂被污染了,到时候阴性对照狂出条带,再去找污染源很麻烦。而且配置体系时候要注意保持实验区的干净,事先可用小喷壶进行酒精喷雾,固定空气中的DNA,而且全程要戴手套,避免污染体系。
2.pcr体系要摸准,最好用人家都做得很多的老体系来上手。
3.要想得到漂亮的电泳图,可以在PCR开始时候就把胶倒上(前提是你的PCR总时间在1.5小时左右,并且1.5小时候之后你还在实验室.),让凝胶凉着,这样凝胶的上样孔会比较规则,胶体里面的其本身的孔径也会较规则。如果你要第二天再跑胶,千万记得把PCR完毕的样本放入4℃保存。第二天做时候建议把胶凉上25分钟左右。
4.电泳上样时候建议使用排枪上样,不仅快速而且样本加到胶孔里的速度一致。当然,排枪上样最好选用进口枪头,国产枪头就不要想了。
5.不管电泳室使用的频率高还是低,我都建议每次电泳时候更换电泳液,避免出现“︿”形条带。
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