阿莫西林及其杂质的液相分析

阿莫西林及其杂质的液相分析

首先参考客户提供液相条件，对客户提供的阿莫西林样品进行分析尝试。
由于梯度条件水相较高，故使用可在100%水相条件下稳定使用的资生堂高极性C₁₈色谱柱CAPCELL PAK AQ；同时，为提高杂质间分离度，我们选择柱效更高的3μm粒径色谱柱进行实验条件的优化。
实验中发现，柱温对阿莫西林杂质B与杂质D2，杂质G与杂质E1，以及杂质H与杂质F间的分离有较大影响，结果如图1所示。

图1 不同温度下分离情况比较

HPLC Conditions
色谱柱：CAPCELL PAK C₁₈ AQ S3; 4.6mm i.d.×250mm
流动相：A : 磷酸缓冲盐* B : 磷酸缓冲盐*/ 乙腈= 80/ 20
25°C B% 0%（0min）→0%（10min）→100%（40min）→100%（45min）→0%（45.1min）→0%（55min）
30°C B% 0%（0min）→0%（10min）→80%（40min）→80%（45min）→0%（45.1min）→0%（55min）
35°C B% 0%（0min）→0%（10min）→70%（40min）→70%（45min）→0%（45.1min）→0%（55min）
流　速：1.0 mL/ min
温　度：25°C、30°C、35°C
检　测：PDA 254nm
浓　度：客户提供
进样量：20µL
*注：磷酸缓冲盐：0.05mol/L 磷酸二氢钾，用2mol/L 氢氧化钾调节pH为5.0

由图1，温度越高，杂质D2保留时间越短，在35℃时杂质D2与杂质A、杂质B得到了完全分离；杂质G和杂质E1在35℃时亦得到良好分离；而杂质H与杂质F在35℃条件下反而重合在一起，无法分离。
经过多番考量，最终选择在柱温31℃条件下对梯度条件进行优化，得到图2结果，同时通过图3单标定位和客户参考谱图共同参考，标定杂质峰序（因有杂质出多个峰，指定仅供参考）。

图2 阿莫西林对照品及放大谱图

（图中显示数字为分离度）

图3 阿莫西林对照品及单标谱图

表1 阿莫西林对照品峰表

HPLC Conditions
色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6mm i.d.×250mm
流动相：A : 磷酸缓冲盐* B : 磷酸缓冲盐*：乙腈 = 8 : 2
B% 0%（0min）→0%（10min）→50%（30min）→100%（40min）→0%（40.1min）→0%（50min）
流　速：1.0 mL / min
温　度：31°C
检　测：PDA 254nm
浓　度：客户提供
进样量：20µL
*注：磷酸缓冲盐：0.05mol/L 磷酸二氢钾，用2mol/L氢氧化钾调节pH为5.0