五维他口服液中维生素的分析
客户要求在分析五维他口服液中的维生素时，烟酰胺与其峰前杂质需得到有效分离。
首先，我们按照客户提供条件，使用CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱对客户提供五维他口服液样品进行分析，结果如图1所示。
烟酰胺与其峰前杂质分离度为1.28，二者未得到有效分离。
图1 五维他口服液分析色谱图（原条件）
注：峰上标数字为分离度（下同）。
HPLC Conditions
色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6mm i.d. × 250mm
流动相： A：庚烷磺酸钠缓冲液（取0.2g庚烷磺酸钠加水溶解后稀释到500mL，加三乙胺1.5mL，用磷酸调节pH值至2.3） , B：甲醇
A：B=80：20
流 速： 1.0 mL/min
温 度： 30 °C
检 测： PDA 275 nm
样 品： 客户提供五维他口服液样品
进样量： 10 µL
接下来我们尝试在此条件基础上，将柱温由30°C调整到25°C，再次进行分析，结果如图2所示。
烟酰胺与其峰前杂质分离度为1.35，分离度稍有改善。
图2 五维他口服液分析色谱图（25°C）
HPLC Conditions
色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm
流动相： A：庚烷磺酸钠缓冲液（取0.2g庚烷磺酸钠加水溶解后稀释到500mL，加三乙胺1.5mL，用磷酸调节pH值至2.3）, B：甲醇
A：B=80：20
流 速： 1.0 mL/min
温 度： 25 °C
检 测： PDA 275 nm
样 品： 客户提供五维他口服液样品
进样量： 10 µL
在此基础上，将流速由1.0mL/min调整为0.8mL/min，希望通过延长保留时间来获得更好的分离效果，结果如图3所示。
烟酰胺与其峰前杂质分离度为1.49，二者分离度得到明显改善。
图3 五维他口服液分析色谱图（25°C, 0.8 mL/min）
HPLC Conditions
色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm
流动相： A：庚烷磺酸钠缓冲液（取0.2g庚烷磺酸钠加水溶解后稀释到500mL，加三乙胺1.5mL，用磷酸调节pH值至2.3）, B：甲醇
A：B=80：20
流 速： 0.8 mL/min
温 度： 25 °C
检 测： PDA 275 nm
样 品： 客户提供五维他口服液样品
进样量： 10 µL
我们继续尝试使用小粒径、分离效果更好的CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱对五维他口服液样品进行分析，结果如图4所示。
烟酰胺与其峰前杂质分离度为2.14，二者可得到有效分离。
图4 五维他口服液分析色谱图（25°C, 0.8 mL/min, AQ S3）
HPLC Conditions
色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6 mm i.d. × 250 mm
流动相： A：庚烷磺酸钠缓冲液（取0.2g庚烷磺酸钠加水溶解后稀释到500mL，加三乙胺1.5mL，用磷酸调节pH值至2.3）, B：甲醇
A：B=80：20
流 速： 0.8 mL/min
温 度： 25 °C
检 测： PDA 275 nm
样 品： 客户提供五维他口服液样品
进样量： 10 µL
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