仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
1
1
1
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
特色服务
>
厂商论坛
>
帖子详情
反相液相色谱维护知识
kromasil爱湾
2017/10/25
私聊
厂商论坛
反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等。本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用:
一、反相色谱柱的选择
1.柱子的PH值使用范围
反相柱优点是固定相稳定,应用广泛,可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料,使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8,流动相的PH值小于2时,会导致键合相的水解;当PH值大于7时硅胶易溶解;经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况,色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时,建议选择PH范围大的柱子,例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。
2.填料的端基封尾(或称封口)
把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾,可改善对极性化合物的吸附或拖尾;含碳量增高了,有利于不易保留化合物的分离;填料稳定性好了,组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物,最好选用填料经端基封尾的色谱柱。
二、
液相色谱
柱的使用
色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、样品的前处理
a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不 可逆吸附的杂质。
c、使用0.45
μ
m的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、流动相的配制
液相色谱
是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点:
a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
b、流动相与样品不产生化学反应
c、流动相的黏度要尽量小,以便得到好的分离效果;降低柱压降,延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器,最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后,一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择
因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1ml/min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8ml/min为佳。
当选用最佳流速时,分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时,可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意:
a.含水流动相最好在实验前配制,尤其是夏天使用缓冲 溶液作为流动相不要过夜。最好加入叠氮化钠,防止细菌生长。
b.流动相要求使用0.45
μ
m滤膜过滤,除去微粒杂质。
c.使用HPLC级溶剂配制流动相,使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命,提高柱性能。
三. 色谱柱的维护
1. 色谱柱的平衡
反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。 每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得最大的”补偿”,而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!操作步骤:
a. 平衡开始时将流速缓慢地提高,用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低,则需要较长的时间来平衡)
b. 如果使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水”过渡”即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡; 分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。
2. 色谱柱的再生
长期使用的色谱柱,往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生,在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。
建议用来冲洗柱子的溶剂体积
色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积
125-4mm 1.6ml 30ml
250-4 mm 3.2ml 60ml
250-10mm 20ml 400ml
选择再生方法:
极性固定相(如Si,NH2* ,DIOL基色谱填料)的再生:
正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
非极性固定相(如反相色谱填料RP-18,RP-8,CN等)的再生: 水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水
注意:
a. 在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能以铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
b. 0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱,如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
3. 色谱柱的维护
a.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)
b.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围
c.避免流动相组成及极性的剧烈变化
d.流动相使用前必须经脱气和过滤处理
e.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中
f.氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。
相关话题
1
青岛崂应版面公开招募专家啦,快来报名吧~此帖长期有效,能者居之!
2
以前还参加过崂应的活动,有一本笔记本留念
3
热烈欢迎青岛崂应版块开版
4
天瑞仪器小版主发来贺电
5
热烈祝贺“青岛崂应”加盟仪器论坛,热烈祝贺“青岛崂应”版面开通~
+关注
私聊
yy_0324
第1楼
2018/01/22
反相
液相色谱
维修知识,介绍的真详细深入!
0
发表回复
近期热榜
迎国庆送壕礼!十月发帖抢大疆云台
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
喜迎国庆!第十七届原创大赛超级原创日参赛奖励翻倍
丹纳赫四十周年寄语征集领大礼包
热门活动
【售后专场--招聘会】
第三届微课大赛投票进行中ing
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
【求助】保护柱套还需要清洗吗?
2010/03/13
【求助】问一个伍丰工作站的问题
2010/03/01
今年还有台历摄影作品征集活动吗?
讨论
2012/11/08
干浴氮吹仪大家用不用?介绍下安谱EFAA-DC12-DA干浴氮吹仪
分享
2012/05/04
高效液相色谱定性分析方法
分享
2013/02/02
坛墨质检-国家标准物质目录(445)
原创
2017/02/04
【求助】帮忙推荐一款色谱柱
2010/02/24
近红外检测血液
求助
2011/11/15
手持式尘埃粒子计数器应用
分享
2024/09/30
手持式尘埃粒子计数器优势
分享
2024/09/30
蔬菜农药残留检测仪的价格影响因素
分享
2024/09/30
点阵式液晶显示驱动/LCD段码液晶驱动IC-VK2C23A/B LQFP64/48 I2C通信接口 省电模式
原创
2024/09/29
抗干扰/抗噪/高稳定性LCD屏显示驱动芯片VK2C21
原创
2024/09/29
食品果蔬农药承诺达标合格证检测打印一体机
分享
2024/09/29
食品肉类水产品氯霉素快速检测系统设备
分享
2024/09/29
食品安全检测粮食蔬果水/海产品肉制品检测仪
分享
2024/09/29
用实力证明 - 技术人员能力好坏“我说行就行”的时代过去了?
第十七届原创
2024/10/02
气象色谱仪显示ALS 故障代码 153是什么情况
求助
2024/09/27
同一个部门的人进门还让登记,宝宝很生气!
第十七届原创
2024/10/03
环境空气氮氧化物曲线斜率偏高怎么办
已应助
2024/09/27
出峰时间和分子离子峰一样,二级质谱图不一样是同种物质吗
求助
2024/09/28
玻璃器皿的质保期
求助
2024/09/28
关于CNAS-G001:2024里的条款理解?
求助
2024/09/30
标准溶液的配置试剂
求助
2024/09/27
气相色谱连续进样峰面积逐渐减小
求助
2017/10/25
未知组分求助!!
悬赏帖
2017/10/25
紫外可见分光光度计使用求助
求助
2017/10/25
SPME-GCMS-FID 分析 玫瑰花细胞液
原创
2017/10/25
小谈在线质谱技术
原创
2017/10/25
【推荐讲座】Tinius Olsen《材料测试革新带动生产力的显著提升》(2017-11-15 10:00)
分享
2017/10/25
【推荐讲座】Tinius Olsen《材料测试革新带动生产力的显著提升》(2017-11-15 10:00)
分享
2017/10/25
【推荐讲座】Tinius Olsen《材料测试革新带动生产力的显著提升》(2017-11-15 10:00)
分享
2017/10/25
品牌合作伙伴
丹纳赫苏州基地 打工人的梦想
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...