头孢克洛有关物质——与9种杂质的共同分析

头孢克洛有关物质——与9种杂质的共同分析

头孢克洛

M.W.: 367.81

图1 AQ S3 分析杂质混合对照溶液结果

1.α-苯甘氨酸 2. 7-ACCA 3. 杂质A 4. 杂质B 5. 苯甘氨酸甲酯盐酸盐 6.杂质C

7. 头孢克洛δ-3异构体 8. 头孢克洛 9. 杂质E 10.杂质D

图2 AQ S3 分析供试品溶液结果

为使头孢克洛和杂质E之间得到更好的分离，我们尝试对色谱条件进行调整。

1.调整柱温

首先对温度进行调整：实验过程中发现柱温对头孢克洛与杂质E的出峰行为有较大影响——当柱温设置为20 ℃时，头孢克洛和杂质E之间能够得到良好分离；将温度提高到30℃时，杂质E向前移动趋势较大。为使杂质E峰出在头孢克洛峰前，避免由于供试品中头孢克洛峰的展宽而使杂质E被包于其内，进一步将柱温提高到40℃，发现头孢克洛与杂质E峰重合；最终，将柱温提高到45℃，此时杂质E峰移至头孢克洛峰前，但未能得到理想的分离结果。

图3 不同柱温条件下AQ S3分析杂质混合对照溶液结果

2.调整流动相

考虑到提高柱温对色谱柱寿命的影响，仍选择初始使用的20℃，对流动相梯度条件进行调整。在增强整体保留时间的同时，发现头孢克洛和杂质E的出峰顺序发生了颠倒，且分离良好，进而有效避免了杂质E被包于头孢克洛主峰中的问题；而在主峰后出峰的杂质D与头孢克洛之间分离度亦较高，即使供试品溶液中的头孢克洛峰展宽，也不会出现将杂质D包于其中的问题。

因此我们在此梯度条件下进一步对供试品溶液进行分析，如图4，头孢克洛与各杂质峰之间均能得到良好的分离结果。

图4 AQ S3分析杂质混合对照溶液及供试品溶液结果（调整梯度）

1.α-苯甘氨酸 2. 7-ACCA 3. 杂质A 4. 杂质B 5. 苯甘氨酸甲酯盐酸盐 6.杂质C

7. 头孢克洛δ-3异构体 8. 杂质E 9. 头孢克洛 10.杂质D

为使客户有更多的色谱柱选择，本实验室也尝试使用键合金刚烷基的高极性色谱柱CAPCELL PAK ADME分析杂质混合对照溶液和供试品溶液，如图5，在分析杂质混合对照溶液时，能够得到各组分的良好分离，同时发现杂质E和头孢克洛出峰顺序发生颠倒，但同时也发现头孢克洛峰与其后相邻杂质D峰之间分离度较低（Rs=1.71）；因此，如图6，在分析供试品溶液时，由于色谱峰向后展宽，使得杂质D被包于头孢克洛主峰中，未能得到理想分离结果。

图5 ADME 分析杂质混合对照溶液结果

1.α-苯甘氨酸 2. 7-ACCA 3. 杂质A 4. 杂质B 5. 苯甘氨酸甲酯盐酸盐 6.杂质C

7. 头孢克洛δ-3异构体 8. 杂质E 9. 头孢克洛 10.杂质D

图6 ADME 分析杂质混合对照溶液结果

之后，我们也尝试使用了CN（氰基柱）和PFP（五氟苯基）以及高碳载量的SUPERIOREX ODS色谱柱，在客户提供的色谱条件下对杂质混合对照溶液进行分析，均未能得到更理想的分离结果。