植物源性食品中百草枯和敌草快残留量的测定

植物源性食品中百草枯和敌草快残留量的测定

液相色谱-质谱/质谱法

1 范围

本方法规定了植物源性食品中百草枯和敌草快的制样和液相色谱-质谱/质谱测定方法。本方法适用于大米、大豆、玉米、小麦、棉籽、干木耳、甘蓝、苹果、香蕉、草莓中百草枯和敌草快残留量的测定和确证。质谱条件：参见附录A，农药方法物质的液相色谱-质谱/质谱图参见附录B，精密度见附录C。

2 原理

试样中百草枯和敌草快残留用甲醇-盐酸溶液匀浆提取，经弱酸性阳离子交换固相萃取柱净化后，用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。

3 试剂和材料

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1 乙腈：色谱纯。

3.1.2甲醇：色谱纯。

3.1.3甲酸：色谱纯。

3.1.4 盐酸

3.1.5 氢氧化钠

3.1.6 盐酸溶液（0.1mol/L）：移取9ml盐酸，用水定容至1L。

3.1.7 氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取4.0g氢氧化钠，用水溶解，并定容至100ml。

3.1.8 甲酸溶液（0.1%）：移取1.0ml甲酸，用水稀释，并定容至1L。

3.1.9 乙腈-0.1%甲酸溶液（1+1，体积比）：量取50ml乙腈，加入50ml0.1%甲酸溶液（3.1.8），混匀。

3.1.10 乙腈-水-甲酸溶液（88+10+2，体积比）：量取88ml乙腈、10ml水和2ml甲酸，混匀。

3.1.11甲醇-0.1mol/L盐酸溶液（1+9，体积比）：量取900ml0.1mol/L盐酸溶液（3.1.6），加入100ml甲醇，混匀。

3.2材料

3.2.1 Oasis WCX固相萃取(SPE)柱：60mg,3ml或性能相当者，使用前依次用1ml甲醇、1ml水活化。

3.2.2 微孔滤膜：0.22 um,有机系。

3.3 方法溶液

3.3.1 方法储备溶液

敌草快二溴盐方法物质：C12H12Br2N2，CAS号85-00-7，纯度大于或等于99.0%。

百草枯二氯盐方法物质：C12H14Cl2N2，CAS号1910-42-5,纯度大于或等于99.0%。

3.3.2 混合方法工作溶液

3.3.2.2将1000ug/mL的方法储备溶液稀释成0.2ug/mL。

3.3.2.3将0.2ug/mL的混合方法溶液分别移取1mL、2mL、4mL、5mL至4个10mL的容量瓶中，浓度依次为0.02 ug/mL、0.04 ug/mL、0.08 ug/mL、0.10 ug/mL、。

3.3.2.4方法混合溶液在0-4冰箱可保存一个月。

3.3.3基质混合方法工作溶液

基质混合方法工作溶液是将上述0.02 ug/mL、0.04 ug/mL、0.08 ug/mL、0.1ug/mL、0.2ug/mL的混合表准溶液分别移取0.5mL至5个棕色进样瓶中，再分别移取0.5mL样品空白基质提取液加入其中。最终五个点的浓度为0.01 ug/mL、0.02 ug/mL、0.04 ug/mL、0.05 ug/mL、0.1ug/mL。基质混合方法工作溶液应现配现用。

4仪器

4.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾（ESI）源。

4.2固相萃取装置。

4.3分析天平：感量0.0001g和0.01g。

4.4均质器。

4.5氮吹仪

4.6离心机：4000r/min。

4.7高速离心机：转速不低于10000r/min 。

4.8pH计。

4.9涡旋混合器。

4.10具塞离心管：50ml。

4.11容量瓶：50ml。

4.12移液管：10ml。

4.13刻度离心管：15ml。

5试样的制备与保存

5.1试样的制备

5.1.1 粮谷、豆类、棉籽和干木耳

取代表性样品500g,取可食部分，经磨碎机充分磨碎，混匀，装入洁净容器，密封并标明标记。

5.1.2 水果、蔬菜类

去壳、去籽、去皮、去茎、去根、去冠（不可用水洗涤），取水可食部分约500g，将其可食部分切碎后，依次用食品捣碎机将样品加工成浆状。混匀，均分成两份做为试样，分装如洁净的盛样袋内，密闭，表明标记。

5.2试样的保存

粮谷、豆类、棉籽和干木耳试样可于0~4保存，水果、蔬菜类试样于-18冷冻保存，在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或者发生残留物含量的变化。

6 测定步骤

6.1 提取

称取约5g（精确至0.01g）试样于50mL具塞离心管中，加入25mL甲醇-0.1mol/L盐酸溶液（3.1.11），均质提取1min，4000r/min离心5min,取上层提取液至50ml容量瓶中，残留物再用20ml甲醇-0.1mol/L盐酸溶液重复提取一次，合并提取液于同一容量瓶中，并用水定容至刻度。准确移取10ml提取液，用1mol/L氢氧化钠溶液（3.1.7）调节pH值至7.0±0.1，并10000r/min离心5min，待净化。

6.2净化

将上述待净化液全部转移至经过预活化的Oasis WCX固相萃取柱中，控制流速在1ml/min-2ml/min，弃去流出液。依次用1ml水、1ml甲醇淋洗净化柱，最后用2ml乙腈-水-甲酸溶液洗脱，控制流速在1ml/min-2ml/min，收集洗脱液于15ml刻度离心管中，洗脱液经45氮吹仪吹干后，用1.0ml乙腈-0.1%甲酸溶液振荡溶解残渣，过0.22um滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

6.3测定

6.3.1 液相色谱-质谱/质谱条件

液相色谱-质谱/质谱条件如下：

a) 色谱柱：Hilic柱，100mm，粒度1.7um，或相当者。

b) 流动相：

A：乙腈，B：0.1%甲酸溶液，梯度洗脱程序见表1.

表1 梯度洗脱程序表

c) 流速：0.25ml/min。

d) 柱温：30。

e) 进样量：5μL。

f)质谱条件：参见附录A。

6.3.2 液相色谱-质谱/质谱检测

X= ……………………………………（1）

表3 敌草快、百草枯在大米基质中添加回收率

附录A

质谱条件和多反应监测条件

表A.2 多反应监测条件

附录B

方法物质色谱图

图B敌草快、百草枯液相色谱-质谱/质谱多反应监测色谱图

附录C

敌草快、百草枯精密度数据表