峰形变差怎么办？Part 2-拖尾

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【大曹色谱 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相豆丁帖】 峰形变差怎么办？Part 1前延[/url]

对于液相分析来说，峰形拖尾问题非常常见。和前延相同，液相方法、化合物结构，以及色谱柱自身等方面均可能导致色谱峰形拖尾。

拖 尾 原 因 ：

1、化合物结构：碱性化合物，配位化合物；

2、色谱柱方面原因：入口端填料被污染

一、针对碱性化合物：

碱性化合物中的有机氮原子通常容易带上正电荷，而硅胶表面残留硅醇基解离后带负电荷，正负电荷间的静电力吸附作用会导致碱性化合物出现严重拖尾现象。

解决对策 ：

1、 对流动相进行调整

1）提高流动相中的盐浓度

2)流动相中添加扫尾剂——三乙胺(TEA)，以减少硅胶表面残存硅醇基的二次影响。需要注意的是，三乙胺为碱性化合物，因此需选择耐碱性色谱柱。

3)流动相中添加0.1%TFA，可抑制硅醇基的解离，同时也可作为离子对试剂来增强保留。

4）提高柱温

举例：柱温对峰形的影响

以盐酸丁卡因的分析为例，如下图，柱温为30℃时，盐酸丁卡因峰不对称因子为1.73，而提高柱温至40℃时，不对称因子为1.29，峰对称性得到了极大改善，说明提升柱温对一些峰形拖尾现象有改善效果。

▲柱温对峰形的影响

2. 更换色谱柱

通常，以硅胶作为基质的常规色谱柱，其表面的残留硅醇基和金属杂质会对碱性化合物的分析造成不良影响，出现色谱峰拖尾等现象。

而大阪曹達CAPCELL PAK系列色谱柱通过独特的聚合物包被处理技术，加上采用高纯度硅胶作为基材，极大程度上屏蔽了残留硅醇基和金属杂质等不良影响，从而在应对碱性化合物等易产生问题的分析时，能够得到良好峰形。

▲CAPCELL PAK 聚合物包被结构示意图

▲吡啶/苯酚的色谱图比较数据

如上图，选择十余款不同厂家色谱柱与CAPCELL PAK系列三款C18色谱柱对吡啶和苯酚进行分析，其他厂家色谱柱均出现了不同程度的色谱峰拖尾、吸附现象；

而CAPCELL PAK C18MG、UG和ACR三款色谱柱得到了对称性良好、峰形尖锐的色谱峰。

二、针对配位化合物

具有配位结构的化合物易与色谱填料表面的金属杂质发生络合反应，从而导致峰形拖尾、甚至不出峰等现象。

▲桧木醇的色谱峰形比较

CAPCELL PAK系列色谱柱以追求最极致精制的高纯度硅胶作为基质，通过独特的金属排除填充技术进行色谱柱生产，从而能让配位性较强的化合物以尖锐峰形溶出。尤其是CAPCELL PAK C18MG和UG120这两款柱型，金属杂质含量更低，对具有配位结构抗生素的分析尤其具有优势。

解决对策：

金属杂质的影响主要来源于填料、色谱柱不锈钢内壁、设备不锈钢管线和色谱柱筛板。可以改进的措施有以下几点：

1）选择金属杂质含量低的高纯硅胶填料柱

2）将进样管线更换为PEEK管线

3）添加1 mmol/LEDTA-2Na到流动相中

三、色谱柱入口端填料被污染

色谱柱入口端填料被污染后，也容易产生拖尾问题。

▲典型色谱柱柱头污染照片&对应分析谱图

解决对策：

对色谱柱进行冲洗：

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