请教各位老师关于革兰氏染色

应助达人

首先玻片上的菌膜在制片的时候要很薄，基本上就是在镜下看仅为一层细菌。其次在脱色的过程中，建议滴加酒精脱色一段时间后，将玻片提起来从菌膜上方用酒精慢慢冲洗，直到留下的酒精为无色为止，如果超过30秒依然有颜色那么就是菌膜太厚了。

应助达人

就是玻片上经脱色以后，肉眼看到只有一点淡淡的颜色是吗？可以直接把玻片倾斜，逐滴洗脱吗？
以前染过一些，但凡是肉眼能明显看到玻片上的颜色，显微镜下就惨不忍睹。

应助达人

如果是G-，理论上脱色厚玻片上只有淡淡的乳白色或灰白色半透明的菌膜。

应助达人

可以倾斜或直立滴加脱色但是不要点到菌膜上。如果是固定好的片子不容易被冲洗掉的

应助达人

谢谢老师解惑，下周再练习练习。
如果其它大肠（耐热、埃希氏、等）呈阳性，是不是间接表明总大肠应是阳性？

应助达人

5750.12中，应该是总大肠阳性（乳糖发酵管）反应后，取乳糖发酵管中一滴培养液转入ec肉汤吗？不知你用的那个标准

应助达人

5750.12中耐热大肠，是总大肠初发酵阳性管接种一环到EC肉汤进行复发酵，复发酵产气及证实耐热大肠阳性。
5750.12中总大肠，是总大肠初发酵阳性管进行伊红美蓝平板画线，染色镜检，G-再接种至乳糖蛋白胨，产酸产气证实为总大肠阳性。
我想请教一下，若同时做总大肠和耐热大肠，已证实耐热大肠阳性，是不是可以给总大肠结果做个参考。。。。。

应助达人

首先不建议同时检测两个项目，这是一个缩小范围的渐进式检测，而且这些培养基本来就具有相对特异性的筛选性能，总大肠阳性了，在看到底是哪种类型的大肠引起的阳性。你调整了检测流程就改变了培养基的筛选性能。
其次水中的大肠的污染率较低，可能就几个cfu，在液体中分散不均，同时检测可坑就会出现总大肠阴而耐热阳性。而EC肉汤阳性也不是100%的就只是耐热大肠引起的，会有其他菌造成假阳性，若再不做反推试验，结果就可能不可靠。

学习了，楼主可以再详细一点吗