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分光光度法绘制标准曲线相关问题

lijing320323

2019/04/25

紫外可见分光光度计（UV）

1、单色光纯度不够

问题：标准曲线上端向下弯曲。

措施：光度法中要求在最大吸收峰处测定吸光度，光度计的有效谱带宽度越窄越好，有利于获得纯度高的单色光。

2.比色皿的厚度或光学性能不一致

如果装试剂空白液的比色皿较其它比色皿薄或对光的吸收和反射少一些，则曲线的延线与纵坐标相交；反之，与横坐标相交。

3.显色反应和反应条件的问题

当显色反应的灵敏度不高时，被测物低于某一浓度就不能显色，当浓度不同时，溶液对光的吸收、散射的程度不同，低浓度段往往弯曲，加上浓度高时部分胶体颗粒的聚沉，致使测定的吸光度降低，曲线上端向下弯曲。

4.操作上的原因

问题：褪色反应，显色溶液的颜色不稳定、易褪色，若比色时间超过了稳定时间，标准系列中高浓度溶液颜色减褪，致使曲线上端向下弯曲。

措施：控制好显色剂的加入时间，可以每加3份，停3～3min，再加上3份，依次进行，以使每支比色管的显色时间相近。

5、干扰物质的影响

标准曲线检验

标准曲线的检验是实际操作中最大的难点，也是工作中误区和争议最多的话题了！

先来了解下最重要的三大检验项目：

1.精密度检验

标准曲线的精密度检验：精密度检验就是看试验点距离拟合的直线的距离有无异常，所以也称线性检验（拟合检验），需用F检验，P<0.05作为线性检验合格的标准。

2.截距检验&斜率检验

标准曲线的截距检验和斜率检验分别考察Y=a+bX中a和b与0的统计学差异，a与0有差别说明有试剂空白或系统误差，而b若与0没差别说明仪器的灵敏度根本达不到分析要求。

标准曲线的检验应该是线性检验结合失拟检验，以及残差的正态性检验结合才是统计学上比较完备的。

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qianguiyun1

第1楼2019/04/26

应助达人

资料挺实用的

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