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【坛墨杯+征文】化妆品中苯基苯并咪唑磺酸等15组分测定的应用综述

不忘初心

2019/07/20

私聊

厂商论坛

1. 目的
依据化妆品卫生规范2015版5.1方法测试，确认此方法对化妆品中苯基苯并咪唑磺酸等15组分含量测定的可行性。
2. 试剂及设备
2.1 试剂
色谱纯甲醇
色谱纯四氢呋喃
优级纯高氯酸
2.2 以下标准物质/标准品由坛墨质检提供：
苯基苯并咪唑磺酸（TMStandard 71060）、二苯酮4和二苯酮5、对氨基苯甲酸（TMStandard 71069）、二苯酮3、对甲氧基肉桂酸异戊酯（TMStandard71148）、4-甲基苄亚基樟脑（TMStandard 71155）、PABA乙基乙酯（TMStandard 71116）、丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷、奥克立林（TMStandard 71090）、甲氧基肉桂酸乙基乙酯、水杨酸乙基乙酯、胡莫柳酯、乙基己酯三嗪酮、亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪
2.3 设备
超声波清洗机

高效液相色谱仪（waters e2695）

3. 测试过程
不含蜡质的样品(护肤类、香波类、粉类等)：称取0.25g试样到25mL具塞比色管中，加入甲醇、四氢呋喃和高氯酸水溶液的混合溶液到刻度，超声提取30分钟，再稀释10倍，经0.45μm滤膜过滤后在高效液相色谱仪(HPLC)上进行分析。
含蜡质的样品(唇膏、口红等)：称取0.25g试样到25mL具塞比色管中，加入四氢呋喃到刻度，超声提取30分钟，再稀释10倍，经0.45μm滤膜过滤后在高效液相色谱仪(HPLC)上进行分析。
4. 仪器条件
按照标准上的参考仪器条件，结合实验室实际情况，确定仪器条件如下：

色谱柱

C18柱，250mm×5mm×4.6μm

进样量

10μL

流速

1mL/min

流动相

A:甲醇
B:四氢呋喃
C:水+高氯酸(300+0.2)
梯度：

时间(min)	溶液A(%)	溶液B(%)	溶液C(%)
0	23	30	47
3	25	45	30
16	25	45	30
17	45	50	5
23	45	50	5
24	23	30	47

柱温箱

30°C

波长

311nm

采集时间

30min

此色谱条件下，标准溶液(50mg/L)色谱峰如下：
由图上可知，此色谱条件下各组分分离良好，基线稳定，适合分析。
5. 线性范围
按标准要求，使用购买的防晒剂类标准物质配制成一定浓度的混合储备液，再通过逐级稀释配制成系列标准曲线工作溶液，在HPLC上进行分析，得到数据如下：

序号	组分名称	STD-1浓度(mg/L)	STD-2浓度(mg/L)	STD-3浓度(mg/L)	STD-4浓度(mg/L)
1	苯基苯并咪唑磺酸	2	10	50	100
2	二苯酮4和二苯酮5	2	10	50	100
3	对氨基苯甲酸	2	10	50	100
4	二苯酮3	2	10	50	100
5	对甲氧基肉桂酸异戊酯	2	10	50	100
6	4-甲基苄亚基樟脑	2	10	50	100
7	PABA乙基乙酯	2	10	50	100
8	丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷	10	50	250	500
9	奥克立林	2	10	50	100
10	甲氧基肉桂酸乙基乙酯	2	10	50	100
11	水杨酸乙基乙酯	2	10	50	100
12	胡莫柳酯	2	10	50	100
13	乙基己酯三嗪酮	2	10	50	100
14	亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚	2	10	50	100
15	双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪	2	10	50	100

	各级别峰面积
级别目标物	1	2	3	4	相关系数(R)
苯基苯并咪唑磺酸	127496	558965	2726856	5296897	0.9999
二苯酮4和二苯酮5	41116	154319	789795	1549325	0.9999
对氨基苯甲酸	26006	159083	918938	1841639	0.9999
二苯酮3	82760	397794	2080293	4164901	0.9999
对甲氧基肉桂酸异戊酯	119435	586779	3092371	6209074	0.9999
4-甲基苄亚基樟脑	104571	507284	2659469	5336465	0.9999
PABA乙基乙酯	141614	652688	3538773	7288231	0.9998
丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷	48574	193379	1015853	2022702	0.9999
奥克立林	163980	797223	4314693	8788580	0.9999
甲氧基肉桂酸乙基乙酯	105460	489531	2549786	5108986	0.9999
水杨酸乙基乙酯	107452	528279	3150082	5792825	0.9986
胡莫柳酯	72858	344531	2383072	4643195	0.9995
乙基己酯三嗪酮	241909	897523	4612026	9182930	0.9999
亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚	57518	283410	1491053	3004190	0.9999
双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪	108847	497738	2621305	5275589	0.9999

从上表可以看出，曲线的相关系数R＞0.995，满足标准要求。
6. 精密度
取10mg/L的混合标准溶液，在HPLC上进行7次测试，计算精密度。

浓度mg/L 目标物	1	2	3	4	5	6	7	RSD
苯基苯并咪唑磺酸	10.154	10.022	10.102	10.054	10.051	9.915	10.118	0.8%
二苯酮4和二苯酮5	9.343	9.512	9.444	9.539	9.421	9.485	9.511	0.7%
对氨基苯甲酸	10.768	10.894	10.607	10.763	10.891	10.892	10.978	1.1%
二苯酮3	9.613	9.447	9.558	9.578	9.535	9.507	9.444	0.7%
对甲氧基肉桂酸异戊酯	9.494	9.474	9.573	9.445	9.495	9.525	9.586	0.5%
4-甲基苄亚基樟脑	9.374	9.494	9.509	9.423	9.555	9.439	9.558	0.7%
PABA乙基乙酯	9.656	9.695	9.689	9.699	9.57	9.841	9.605	0.9%
丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷	46.089	46.308	48.208	46.861	46.844	47.772	46.715	1.6%
奥克立林	9.507	9.629	9.577	9.604	9.55	9.677	9.578	0.6%
甲氧基肉桂酸乙基乙酯	9.076	9.23	9.234	9.241	9.369	9.599	9.278	1.7%
水杨酸乙基乙酯	45.493	46.246	44.748	46.114	46.840	47.650	47.647	2.3%
胡莫柳酯	53.762	53.990	53.471	53.777	53.548	52.774	52.334	1.1%
乙基己酯三嗪酮	9.039	9.086	9.058	9.112	9.118	9.155	9.146	0.5%
亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚	9.381	9.504	9.340	9.532	9.565	9.409	9.470	0.9%
双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪	9.387	9.447	9.443	9.422	9.486	9.451	9.441	0.3%

7次测试相对标准偏差RSD均小于5%，精密度良好。
7. 样品加标回收率
选取两种化妆品，唇膏和防晒乳样品，分别添加12.5mL的100mg/l防晒剂类混合标准储备液溶液，样品中理论加标浓度为5~50mg/l，按样品测试过程进行操作，重复3次，考察样品加标回收率。

唇膏加标	测得浓度mg/L				回收率
	样品	加标-1	加标-2	加标-3	加标-1	加标-2	加标-3
苯基苯并咪唑磺酸	ND	4.149	4.174	4.220	83.0%	83.5%	84.4%
二苯酮4和二苯酮5	ND	4.465	4.611	4.606	89.3%	92.2%	92.1%
对氨基苯甲酸	ND	4.325	4.431	4.412	86.5%	88.6%	88.2%
二苯酮3	24.040	29.326	29.325	29.424	105.7%	105.7%	107.7%
对甲氧基肉桂酸异戊酯	ND	4.640	4.797	4.780	92.8%	95.9%	95.6%
4-甲基苄亚基樟脑	ND	4.645	4.768	4.749	92.9%	95.4%	95.0%
PABA乙基乙酯	ND	5.123	5.300	5.305	102.5%	106.0%	106.1%
丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷	ND	21.771	22.687	22.567	87.1%	90.7%	90.3%
奥克立林	ND	4.710	4.747	4.737	94.2%	94.9%	94.7%
甲氧基肉桂酸乙基乙酯	70.845	75.905	75.411	75.070	101.2%	91.3%	84.5%
水杨酸乙基乙酯	ND	26.973	25.761	26.113	107.9%	103.0%	104.5%
胡莫柳酯	ND	29.223	28.625	29.644	116.9%	114.5%	118.6%
乙基己酯三嗪酮	ND	4.383	4.328	4.373	87.7%	86.6%	87.5%
亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚	ND	4.495	4.800	4.673	89.9%	96.0%	93.5%
双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪	ND	4.522	4.744	4.739	90.4%	94.9%	94.8%

防晒乳加标	测得浓度mg/L				回收率
	样品	加标-1	加标-2	加标-3	加标-1	加标-2	加标-3
苯基苯并咪唑磺酸	ND	4.172	4.207	4.476	83.4%	84.1%	89.5%
二苯酮4和二苯酮5	ND	4.291	4.252	4.969	85.8%	85.0%	99.4%
对氨基苯甲酸	ND	4.585	4.118	4.079	91.7%	82.4%	81.6%
二苯酮3	ND	4.036	4.614	4.219	80.7%	92.3%	84.4%
对甲氧基肉桂酸异戊酯	ND	4.755	4.066	4.197	95.1%	81.3%	83.9%
4-甲基苄亚基樟脑	ND	4.438	4.033	4.064	88.8%	80.7%	81.3%
PABA乙基乙酯	ND	4.472	4.263	4.272	89.4%	85.3%	85.4%
丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷	ND	21.043	21.83	22.358	84.2%	87.3%	89.4%
奥克立林	ND	4.126	4.252	4.337	82.5%	85.0%	86.7%
甲氧基肉桂酸乙基乙酯	29.024	33.928	33.319	33.446	98.1%	85.9%	88.4%
水杨酸乙基乙酯	ND	26.882	27.959	29.646	107.5%	111.8%	118.6%
胡莫柳酯	ND	26.055	27.933	27.630	104.2%	111.7%	110.5%
乙基己酯三嗪酮	ND	4.503	4.009	4.288	90.1%	80.2%	85.8%
亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚	ND	4.129	4.022	4.080	82.6%	80.4%	81.6%
双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪	ND	4.850	4.041	4.057	97.0%	80.8%	81.1%

回收率要求80%-120%.
分别进行3次测试，回收率都在80%~115%之间，满足测试要求。
8. 方法检出限(MDL)和定量检出限(LOQ)
选取空白样品添加12.5mL的100mg/l防晒剂类混合标准储备溶液，样品中理论加标浓度为8~20mg/L，按样品测试过程进行操作，重复7次，通过标准偏差来计算检出限。

	1	2	3	4	5	6	7	SD	MDL (3*SD)	LOQ (10*SD)	LOQ (mg/kg)
苯基苯并咪唑磺酸	4.15	4.17	4.22	4.12	4.07	4.13	4.18	0.05	0.14	0.48	476
二苯酮4和二苯酮5	4.47	4.61	4.61	4.61	4.48	4.61	4.63	0.07	0.20	0.68	683
对氨基苯甲酸	4.33	4.43	4.41	4.33	4.31	4.31	4.45	0.06	0.18	0.62	617
二苯酮3	29.33	29.33	29.42	29.49	29.36	29.31	29.34	0.06	0.19	0.65	649
对甲氧基肉桂酸异戊酯	4.64	4.80	4.78	4.80	4.79	4.80	4.87	0.07	0.21	0.69	689
4-甲基苄亚基樟脑	4.65	4.77	4.75	4.74	4.75	4.78	4.74	0.04	0.13	0.44	445
PABA乙基乙酯	5.12	5.30	5.31	5.36	5.27	5.33	5.28	0.08	0.23	0.77	766
丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷	21.77	22.69	22.57	22.07	22.40	22.46	22.41	0.31	0.94	3.14	3142
奥克立林	4.71	4.75	4.74	4.97	4.79	4.77	4.92	0.10	0.30	0.99	990
甲氧基肉桂酸乙基乙酯	75.51	75.41	75.57	75.50	75.50	75.50	75.50	0.05	0.14	0.46	463
水杨酸乙基乙酯	26.97	25.76	26.11	26.07	26.66	26.39	26.64	0.42	1.25	4.17	4169
胡莫柳酯	29.22	28.63	29.64	29.75	29.36	28.89	28.42	0.50	1.51	5.04	5039
乙基己酯三嗪酮	4.38	4.33	4.37	4.39	4.36	4.39	4.42	0.03	0.08	0.28	278
亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚	4.50	4.80	4.67	4.76	4.87	4.80	4.93	0.14	0.43	1.42	1421
双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪	4.52	4.74	4.74	4.73	4.80	4.91	4.94	0.14	0.41	1.38	1376

以7次加标测试值相对偏差的10倍作为定量检出限，按称样量0.25g，加入萃取液体积25mL，再稀释10倍，计算得到的定量检出限为116~216mg/kg，，而化妆品安全技术规范5.1中苯基苯并咪唑磺酸等组分的定量限为：
通过对比可知，实验室的实际定量检出限能够标准方法的定量限要求，可按照此方法开展测试。
9. 结果与讨论
实验室按照化妆品安全技术规范5.1方法进行测试和验证，考察了线性相关系数、精密度、回收率及检出限等参数，结果均满足要求，实验室可以依据此方法开展化妆品中苯基苯并咪唑磺酸等15组分含量的测定工作。同时坛墨质检提供的15种标准物质也可以用于标准工作曲线溶液的配制以及检测工作中的质量监控。
参考文件
【1】化妆品安全技术规范2015版
【2】 GB/T27417-2017 合格评定化学分析方法确认和验证指南
【3】 CNAS-CL01-A002:2018检测和校准实验室能力认可准则在化学检测领域的应用说明