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水杨酸与2，5-二羟基苯甲酸无法分离出来

wxyshirley

2019/08/01

液相色谱（LC）

我们是用水杨酸捕捉羟基自由基，以前的做法是用C18的色谱柱，5%的乙醇做流动相，流速是0.3，把标准样用35%乙醇稀释400倍进样，以前的标准样是可以检测出两个峰的（水杨酸和2，5-二羟基苯甲酸），但后来柱子坏了换了一根色谱柱，也是C18的，但不同型号的，用回原来的方法就无法出峰，只有一个溶剂峰，但两种主要物质出不来，后来把流动相换成10%的乙醇、30mMol醋酸钠醋酸缓冲液（ph4.9）都试过还是无法出峰。后来老师让我们用样品原液不稀释进样，峰是出来了，但峰高度很低而且面积也不大，而且很多杂质峰，峰型也很奇怪，重点是水杨酸以及2.5二羟基苯甲酸的保留时间几乎一样，无法分离。
以前是标准样稀释400倍就能出峰的，现在为什么用原液峰面积也这么小？还有保留时间一样应该怎么处理？很急啊，谢谢。

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有水有渝

第1楼2019/08/01

应助达人

把前后色谱柱的品牌、规格（长度、粒径等）说明一下，另外流动相能用甲醇就不要用乙醇。把检测器的灯能量检查一下，实在不行只能买加原来那款色谱柱试试

0

hujiangtao

第2楼2019/08/01

应助达人

用乙酸铵试试

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