爱博才思AB5500-QTRAP-MRM-IDA-EPI采样方法建立及采样案例详解
液质联用仪凭借其快速、稳定、特异和高灵敏度等特点已广泛应用于食品安全、环境保护、法医检测和临床检查等领域。在食品安全，环境，公安法医等领域，我们常用MRM离子比率进行定性。质谱多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)技术是一种基于已知信息或假定信息有针对性地获取数据，进行质谱信号采集的技术。但是否有更加先进、准确的定性方式呢？在研究药物代谢领域，通常仅有母体药物标液，而没有代谢产物的标液。怎样在没有代谢产物标液的情况下进行代谢产物定性分析呢？
我们使用的 SCIEXQTRAP®系列质谱仪，凭借其混合线性离子阱扫描模式，可以帮助我们解决上述问题，而且它的Product Ion灵敏度比普通的三重四极杆高500倍以上。本文以MRM-IDA-EPI的方法设置为例，在得到MRM信号的同时，获得其二级扫描质谱图。在食品安全、环境、公安法医等领域，可利用二级扫描质谱图进行定性。在研究药物代谢领域，可使用代谢产物二级质谱图与母药质谱图进行质谱解析，从而确定产物是否与母药相关。
首先我们建立MRM-IDA-EPI采样方法：
1、打开MRM的采样方法，其中离子对需要包括母药的分子量及其碎片离子分子量的MRM和MIM组合，还需要包括代谢产物的MRM和MIM组合。可将定性离子对删掉。
2、进入Edit Parameters，把Collision Gas更改为High。这是保证MRM-IDA-EPI正常采样必须具备的气路条件。
3、在MRM下点击鼠标右键，选择Add IDA Criteria Level点击鼠标左键。增加一个针对响应的阈值限定。
4、IDA的参数设置，按需求修改阈值；一般我们按照化合物的响应设置，例如Which exceeds: 5000——阈值（默认5000）。当MRM的信号超过阈值5000时将触发EPI。
更改Exclude former target ions为Never。Exclude formertarget ions: Never——当超过阈值，MRM与EPI交替进行，将获得多张EPI图谱。
5、在IDA Criteria点击鼠标右键，选择Add experiment，超过阈值即触发EPI，增加EPI的实验参数设置。
6、在增加的experiment中，Scan type更改为Enhanced ProductIon, Number of scans更改为1，修改扫描范围。扫描范围的Start一般从50Da开始；Stop一般需要包括MRM表中最大的母离子。当输入完成后，扫描列表会自动分段。
7、确保EPI的Parameters中的源气参数要与MRM的一致。
8、修改EPI的Compound参数，DP的取值，可使用化合物在MRM模式下DP的平均值或响应最低的化合物DP值。
9、“保存”或“另存为”采样方法，方法后缀名为dam。使用该方法进样测试。
下面为大家举一个实例和数据图，增强各位对MRM-IDA-EPI的理解。我们研究的药物是防治失眠症的 右佐匹克隆。其物理性质不稳定，在多种含羟基的溶剂中极易分解，分解产物是2-氨基-5-氯吡啶，两个化合物的结构图见下图。右佐匹克隆在我们的分析时间是12分钟出峰，EPI模式下，分解产物在7分钟出峰，我们的方法成功对其进行了定性检测分析。
右佐匹克隆：
2-氨基-5-氯吡啶：
下图为MRM-IDA-EPI模式下右佐匹克隆的出峰图：
下图为MRM-IDA-EPI模式下2-氨基-5-氯吡啶的出峰图：
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