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液相色谱做阿胶4个氨基酸测定只出3个峰，求大神帮忙

ppp211530

2019/08/13

液相色谱（LC）

柱子是迪马钻石 C18 5um 250*4.6mm 柱体积4.2ml 流动相和对照品的制备全部按照药典规定进行：
以乙腈-0.1mol／L醋酸钠溶液(用醋酸调节pH值至6.5)(7：93)为流动相A，以乙腈-水(4：1)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为43℃。理论板数按L-羟脯氨酸峰计算应不低于4000。
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～11 100→93 0→7
11～13.9 93→88 7→12
13.9～14 88→85 12→15
14～29 85→66 15→34
29～30 66→0 34→100
对照品溶液的制备取L-羟脯氨酸对照品、甘氨酸对照品、丙氨酸对照品、L-脯氨酸对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml分别含L-羟脯氨酸80μg、甘氨酸0.16mg、丙氨酸70μg、L-脯氨酸0.12mg的混合溶液，即得
精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各5ml，分别置25ml量瓶中，各加0.1mol/L异硫氰酸苯酯(PITC)的乙腈溶液2.5ml，1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，摇匀，室温放置1小时后，加50％乙腈至刻度。摇匀。取10ml，加正己烷10ml，振摇，放置10分钟，取下层溶液，滤过，取续滤液，即得。
出图如下：
图1是走空白基线的图
图2是进样后出图

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有水有渝

第1楼2019/08/13

应助达人

18分钟那不是有一个峰没分开吗？把梯度中的B相的比例降一点看看能不能分开

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