香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素，均为广泛使用的可食用香料。有浓烈的奶香气息，在香荚兰的种子中可以找到，也可以人工合成，被广泛的运用到，蛋糕、奶粉、冰激凌等食品的制作中。今天我们就来做一下在奶粉和蛋白粉中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的检测。
适用范围
适用于奶粉、蛋白粉中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的检测。
溶液的配置
1）标准储备液：分别精确称取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素10mg，分别用乙腈溶解并定容到10mL，浓度为1000mg/L。
2）20%甲醇：移取20mL的甲醇，用水定容至100mL。
3）5%乙酸甲醇：移取5mL乙酸，用甲醇定容至100mL。
4）50%乙腈：移取50mL的乙腈，用水定容至100mL。
提取步骤
奶粉
1） 移取1g样品，加入10mL的水，振荡，超声10min，离心10min（8000r/min），吸取上清液；
2） 再加入10mL水，振荡，超声10min，离心10min（8000r/min），吸取上清液；
3） 重复2）的过程，合并所有上清液，混匀，再次离心2min,待净化。
蛋白粉
移取0.5g样品，加入10mL的水振荡，8000rpm下离心，取澄清液，再重复2次，总计30mL水提取，待净化。
SPE净化步骤
SPE柱：月旭Welchrom®P-SAX规格：150 mg/6mL。
活化：5 mL 甲醇、5 mL 水，弃去；
上样：待净化液15mL上样，控制流速，不宜过快，弃去；
淋洗：6mL20%甲醇水淋洗，弃去。
洗脱：15mL5%乙酸甲醇洗脱，收集于旋转蒸发瓶，并抽干小柱。
复溶：洗脱液在45℃下减压蒸干，用50%乙腈定容至1mL。过0.22μm滤膜，上HPLC检测。
色谱条件
色谱柱：月旭Ultimate®XB-C18 4.6×250mm,5μm
流动相：A-0.1%磷酸溶液，B-甲醇（A/B=70/30等度洗脱）
流速：1.0mL/min
柱温：30℃
进样量：20μL
检测波长：280nm
色谱图或者加标回收率结果
图1.奶粉对照香兰素20mg/L、甲基香兰素5mg/L、乙基香兰素10mg/L图谱
图2.奶粉粉样过柱图谱
图3.奶粉样加标香兰素20mg/L、甲基香兰素5mg/L、乙基香兰素10mg/L图谱
图4.蛋白粉对照香兰素100mg/L、甲基香兰素5mg/L、乙基香兰素15mg/L图谱
图5.蛋白粉样过柱图谱
图6.蛋白粉样加标香兰素400mg/kg、甲基香兰素20mg/kg、乙基香兰素60mg/kg图谱
表1.奶粉香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素过P-SAX小柱加标回收表
表2.蛋白粉香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素过P-SAX小柱加标回收表
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