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荧光仪测出的波长与液相上使用的波长不一致

xmgulong

2019/11/11

本人做某物质A的高效液相-荧光检测，参考文献中物质A的最大激发和发射波长分别是273和414 nm，我用高效液相荧光检测时如参考文献所设置，得到的色谱峰与紫外对比有明显增强。但是我用LS-55扫描的结果是最大激发和发射波长在331和395nm，在273 nm和414 nm几乎没有峰值；在液相上设置激发波长为314，发射波长为414 nm时，得到的峰明显比273的小。请问这是为什么呢？还望高人指点。

我用的流动相是甲醇和水，所以样品是用甲醇配的，用LS-55测光谱操作如下
1.固定发射波长414，扫描纯甲醇的激发谱，当做空白
2.待测样品扣除1，得到激发光谱，激发峰值在331 nm 但是在激发峰后出现一个倒峰，对比空白发现是在发射波长414nm处（1 空白在414nm处有个很大的峰）
3.固定激发波长331 nm，扫描纯甲醇的发射谱，当做空白
4. 待测光谱扣除3，得到发射光谱，峰值在395nm

xmgulong

第1楼2019/11/11

我也遇到过同样的问题

首先，文献值不可尽信，你还是自己做一遍比较好，做荧光时由于溶剂，浓度还有狭缝等仪器参数的设置不同，得到的结果就可能会不一样。

其次，我做的物质在其他条件均一样的情况下，以甲醇做溶剂比以水做溶剂的荧光强度明显要大，我认为是甲醇具有增强荧光的作用，有关于甲醇在这方面的文献

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