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荧光仪测出的波长与液相上使用的波长不一致

测试版面

  • 本人做某物质A的高效液相-荧光检测,参考文献中物质A的最大激发和发射波长分别是273和414 nm,我用高效液相荧光检测时如参考文献所设置,得到的色谱峰与紫外对比有明显增强。但是我用LS-55扫描的结果是最大激发和发射波长在331和395nm,在273 nm和414 nm几乎没有峰值;在液相上设置激发波长为314,发射波长为414 nm时,得到的峰明显比273的小。请问这是为什么呢?还望高人指点。

    我用的流动相是甲醇和水,所以样品是用甲醇配的,用LS-55测光谱操作如下
    1.固定发射波长414,扫描纯甲醇的激发谱,当做空白
    2.待测样品扣除1,得到激发光谱,激发峰值在331 nm 但是在激发峰后出现一个倒峰,对比空白发现是在发射波长414nm处(1 空白在414nm处有个很大的峰)
    3.固定激发波长331 nm,扫描纯甲醇的发射谱,当做空白
    4. 待测光谱扣除3,得到发射光谱,峰值在395nm
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  • xmgulong

    第1楼2019/11/11

    我也遇到过同样的问题

    首先,文献值不可尽信,你还是自己做一遍比较好,做荧光时由于溶剂,浓度还有狭缝等仪器参数的设置不同,得到的结果就可能会不一样。

    其次,我做的物质在其他条件均一样的情况下,以甲醇做溶剂比以水做溶剂的荧光强度明显要大,我认为是甲醇具有增强荧光的作用,有关于甲醇在这方面的文献

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