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菜鸟请教高手液相色谱图相关问题

测试版面

  • 刚开始做液相分离抗菌肽,初步做出一个色谱图,但不知如何改进色谱条件来获得更好的分离效果,请大家指点指点啊!谢谢!
    色谱条件如下
    流动相:乙腈,水梯度洗脱
    0-2min:乙腈80%
    2-4min:乙腈80%-60%
    4-10min:乙腈60%-80% 这个洗脱梯度不知道是否合理,请大家指点指点吧
    流速:1ml/min
    色谱柱:ODS HYPERSIL Dim(mm)300*4.6
    检测波长:UV280nm
    +关注 私聊
  • junxi2008

    第1楼2019/12/09

    1、一般情况下,分离肽类样品流动相中应加入离子对试剂TFA(0.05-0.1%),你可以根据你的样品进行试验;
    2、梯度设置肯定有问题,样品在3分钟左右基本出完,而且没有分离,说明你开始的有机相比例过大,建议有机相从30%左右开始,以每分钟两个比例的梯度增加至90%,然后根据谱图再进行细调。

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