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【转帖】生物制样步骤图

shehuangqi

2007/02/14

透射电镜（TEM）

透射电镜生物样品制备步骤
一．取材
组织块小于1立方毫米
二．固定
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分三次
1%锇酸固定液固定 2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分三次
三．脱水
50%乙醇 15-20分
70%乙醇 15-20分
90%乙醇 15-20分
90%乙醇 90%丙酮（1：1） 15-20分
90%丙酮 15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮室温 15-20分三次
四．包埋
纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液（1：2）室温过夜
纯包埋液 37度 2-3小时
五．固化
37度烘箱内过夜
45度烘箱内 12小时
60度烘箱内 24小时
六．超薄切片机切片 50-60 nm
七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八．透射电镜观察。拍片
透射电镜生物样品制备步骤
一．取材
组织块小于1立方毫米
二．固定
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分三次
1%锇酸固定液固定 2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分三次
三．脱水
50%乙醇 15-20分
70%乙醇 15-20分
90%乙醇 15-20分
90%乙醇 90%丙酮（1：1） 15-20分
90%丙酮 15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮室温 15-20分三次
四．包埋
纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液（1：2）室温过夜
纯包埋液 37度 2-3小时
五．固化
37度烘箱内过夜
45度烘箱内 12小时
60度烘箱内 24小时
六．超薄切片机切片 50-60 nm
七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八．透射电镜观察。拍片

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jhmn

第1楼2007/02/15

感谢楼主给予扫盲.

如果可能的话,请继续介绍生物电子现微学其它常见制样方法,比如说,负染, 包埋,埋冷冻技术(cyro-TEM)等.只是听说过,但不知道具体过程以及各种方法的用途和优劣.

另外请问,如果把一种蛋白质晶体直接放在扫描或透射电子显微镜下观察,在最好的情况下,可能会得出任何有用信息吗?

0

nbwlj

第2楼2007/02/26

你是一个好人！

0

szukkboy

第3楼2007/09/07

很详细的制样资料啊。。。

0

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