我在做多肽药物时遇到下列问题： 1). 基线不稳定波动大，流动相 A：1%TFA水溶液， B:1%TFA乙腈溶液，检测波长 210nm 流速 1.0ml/ml ，什么原因 ?怎么解决 ?TFA有什么作用 ?流动相中不加 TFA见不到主峰， 基线良好。 2) 做完肽类样品时怎么冲洗 C18比较好 ;3) 药典上介绍测定分子量大于 2000 的样品，选择柱子填料的孔径为 30nm，30nm与 10nm

应该是起“离子对”的作用吧。在做多肽类样品的时候， 300A孔径的
填料相对 100A孔径肯定要选择性好点，也就是分离度相对比较好点。流动相加
入 TFA，在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸 (TFA)作为离子
对试剂是常见的手段。 流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面
以多种模式相互作用， 来改善峰形、 克服峰展宽和拖尾问题。 三氟乙酸优于其他
离子修饰剂的原因是它容易挥发， 可以方便地从制备样品中除去。 另一方面， 三
氟乙酸的紫外最大吸收峰低于 200nm，对多肽在低波长处的检测干扰很小。