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考马斯亮蓝法的局限是否在这里？

junxi2008

2020/04/17

最近在检测玉米浸泡水中的蛋白质含量，发现用考马斯亮蓝法测出的蛋白质含量很低，在1g/L以下，而用凯氏定氮法测出含量在100g/L以上。是否说明其中大部分都是小分子的多肽和氨基酸，大分子蛋白含量很少？考马斯亮蓝法的局限是否在这里？对于小肽无法检测？
这时候是否可以用三氯乙酸处理后取上清直接用茚三酮的方法测氨基酸含量，然后用凯氏定氮法测总氮量（即小肽和氨基酸的总量），两者的差值极为小肽含量？
但是问题采用茚三酮的方法时候，是否小肽也会和茚三酮反应，从而影响导致测的氨基酸含量不准？

haishinihao

第1楼2020/04/17

考马斯亮蓝和folin-酚法等测蛋白的方法都只能测可溶性蛋白，凯氏定氮测定是粗蛋白含量（总氮），玉米中的蛋白，主要存在于胚乳当中，主要以醇溶蛋白和谷蛋白居多，这些都是非水溶性的蛋白，而且小分子肽一般通过对大分子蛋白质降解得到，用水浸泡得到小分子肽这种说法是不科学的。

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