关于药动学的实验设计求助

应助达人

感觉吸取10ul样品有点少，容易造成比较大误差，我们一般吸50ul左右平行还可以

谢谢老师，我这边改了以下方案，能麻烦您帮忙看看吗？

标曲点设置：

体内血药浓度最大不超过0.1mg/ml（100ug/ml），按照网上求助经验，按照该给药方案，体内血药浓度最大不超过30ppm（可以通过后续最早的采血点血样进行验证，如果不够，标曲浓度做大即可），因此标曲可以设置为：
50ppm, 20ppm, 10ppm, 5ppm, 2ppm, 1ppm, 0.5ppm, 0.2ppm, 0.1ppm, 0.05ppm (最高血药浓度点和最低点倍数关系1000倍)，但是此浓度太大，不适合进样仪器，需要对标曲进行稀释10倍，得：

5ppm, 2ppm, 1ppm, 0.5ppm, 0.2ppm, 0.1ppm, 0.05ppm, 0.02ppm, 0.01ppm,0.005ppm

标曲液的配制：

1、 工作液的准备：量取10mg奥美拉唑和右美沙芬，并取一支（规格2ml,5mg/ml）咪达唑仑，共同溶于10ml容量瓶，制得1mg/ml的工作液，然后根据此工作液稀释出以下浓度的混标工作液：

400ug/ml， 200ug/ml, 100ug/ml, 40ug/ml, 20ug/ml,10ug/ml,4ug/ml, 2ug/ml, 1ug/ml

2、取空白血190ul，用移液枪分别移取1mg/ml，400ug/ml, 200ug/ml, 100ug/ml,40ug/ml, 20ug/ml, 10ug/ml, 4ug/ml, 2ug/ml, 1ug/ml的工作液10ul,涡旋混匀 （此时三种药物浓度梯度变成50ug/ml, 20 ug/ml, 10 ug/ml, 5 ug/ml,2 ug/ml, 1 ug/ml, 0.5 ug/ml, 0.2ug/ml, 0.1 ug/ml, 0.05 ug/ml）,从上述血样中，取100ul，加入5ul内标（浓度10ug/ml），再加入895ul乙腈，涡旋5min，在12000r/min下离心10min,取上清液进样（此时浓度分别稀释了10倍：5ppm, 2ppm, 1ppm, 0.5ppm, 0.2ppm,0.1ppm, 0.05ppm, 0.02ppm, 0.01ppm, 0.005ppm），红色部分即为样本血浆的前处理方式。

应助达人

我觉得你没必要做稀释方法学。没有必要在样品提取前把样品稀释，而是在样品处理后，进样前将溶液稀释即可，且处理的样品与标曲同样操作即可。例如取100血加300乙腈沉淀，离心取上清10微升加初始流动相990微升。
看了你的药动方案，不知道mg级别的药物静注大鼠会不会中毒，注射的体积和浓度是需要考量的。

老师，请问“取100ul血，加300ul乙腈沉淀，离心后取10ul上清液，加流动相990ul”这个血浆中药物稀释倍数算多少倍呢？30倍还是10倍？

应助达人

后面稀释是100倍，前面加的乙腈可以少点体积方便计算

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