仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

求助:PCR条带弥散严重,怎么破?

PCR

  • 最近200bp DNA PCR实验一直都是这样,以前挺好的,突然就一直是弥散了,不知道问题出在哪里。请各位老师指点一下。感谢老师们帮忙呀!

    +关注 私聊
  • 123

    第1楼2022/03/31

    应助达人

    1,看看模版是否降解,如果降解重新提取,如果没有请看2

    2,做实验是可设置阴性对照和阳性对照,可看出是体系的问题,还是pcr条件的问题。

    3,若阳性对照有目的条带则说明,引物,体系,条件没有太大问题,可能是模版含有某些抑制因素,镁离子和退火温度等可以进行相应的调整,如何调整可以问度娘。

    4,若没有目的条带可重新换药品,为了安全,全部用新的或者别人用的好用的。调整到阳性对照出来为止。再重新回头考虑第3条。

0
    +关注 私聊
  • mingxiaoyan

    第2楼2022/03/31

    可能原因:
    酶用量过多
    模板纯度较低
    dNTP、镁离子浓度过高
    循环次数过多
    解决方法:
    减少用酶量或使用特异性高的热启动酶扩增
    纯化模板
    减少dNTP用量,摸索镁离子浓度
    减少循环次数

0
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...