内标法的一些疑问

还有就是如果内标做出来回收率低的话，我还能不能用校正因子来算呢？

应助达人

1.想问一下用内标法需不需要每次都做标曲？------------------------------看实验需求，一般来说以其稳定，方法没问题，在的QC在偏差接受范围内就可以不用每次配标曲
2.我想只进一个中间浓度的标样来考察仪器的灵敏度可不可以？---------------------------------------------------------------你确定你想要看的是灵敏度？一般用信噪比去算
3.还有就是在预处理前添加内标物，是不是即使预处理存在一定的损失，也可以用内标物的损失来得到一个校正因子，从而得到准确一点的结果？---------------------------------------前处理前添加了内标，前处理一定会有损失。“也可以用内标物的损失来得到一个校正因子，从而得到准确一点的结果”我是建议你去看下药典0512内标法描述，你就会很清楚了
4.还有就是如果内标做出来回收率低的话，我还能不能用校正因子来算呢？---------------------------------内标的回收率不能太低，否则会影响结果可靠性，你看下内标法怎么计算的就知道

应助达人

内标法可以同时校正前处理损失和基质效应，首选同位素内标；可以用一个标曲浓度点验证，在曲线范围就可以用原来的

想再请教下老师，1.校正因子其实就是标曲的斜率。2.我看了药典上0512内标法的描述，然后又看了岛津液相操作说明书里面的内标法，纵坐标是浓度比，横坐标是面积比，我们上样测得面积比之后，然后我们要计算目标物浓度的话，这里的内标物浓度就是带预处理前加的内标物浓度对吗？不用考虑实际上机测定的值.3.如果我做一个内标物的外标标准曲线，当上机测定某个样品发现内标物响应峰面积较低（即内标物浓度较低），我就重新做样，用这种方法来做质控可以吗？因为样品量较多，如果做平行的话课题没那么多钱。
感谢老师指点

应助达人

1.校正因子其实就是标曲的斜率。
2.我看了药典上0512内标法的描述，然后又看了岛津液相操作说明书里面的内标法，纵坐标是浓度比，横坐标是面积比，我们上样测得面积比之后，然后我们要计算目标物浓度的话，这里的内标物浓度就是带预处理前加的内标物浓度对吗？不用考虑实际上机测定的值.-------------------------------------------------------是的，不用考虑上机测定值，计算的时候是以添加值计算，这样才能扣减点前处理损失和仪器因素带来的不利影响
3.如果我做一个内标物的外标标准曲线，当上机测定某个样品发现内标物响应峰面积较低（即内标物浓度较低），我就重新做样，用这种方法来做质控可以吗？因为样品量较多，如果做平行的话课题没那么多钱。---------------------------“如果我做一个内标物的外标标准曲线”没大看懂，是拿内标当外标配标曲跑吗？这样做是想看啥呢？“当上机测定某个样品发现内标物响应峰面积较低（即内标物浓度较低），我就重新做样，用这种方法来做质控可以吗？”这个说明方法不成熟，有可能是前处理损失太多，也有可能是化合物MS/LC方法不合适，平行是每批样品必须要做的

第三点我再描述一下，“是拿内标当外标配标曲跑吗？这样做是想看啥呢？”， 是拿内标配外标标曲跑，想看内标物在前处理上的损失多不多，损失过多就认为是前处理步骤上出现了错误（前处理方法会在前期通过加标回收验证），目的就是考察前处理是否出现操作失误（主要目的是避免出现操作失误而我自己都不知道，因为我是不打算做平行样的）。前处理方法和LC-MS方法都会在前期通过加标回收来验证。
我会这么想的原因是上次问了一个做气质的老师，他说有些时候样品量大或者前处理麻烦的时候，不做平行样是可以理解的，但是一定要加替代物来做质控，如果那个替代物测出来的结果很低，那就说明这个样品抗生素也是有比较大的损失的，或者说这个结果不准确。我认为内标物在预处理前加入的话，也能起到替代物监控整个过程的作用。

应助达人

第三点我再描述一下，“是拿内标当外标配标曲跑吗？这样做是想看啥呢？”， 是拿内标配外标标曲跑，想看内标物在前处理上的损失多不多，损失过多就认为是前处理步骤上出现了错误（前处理方法会在前期通过加标回收验证），目的就是考察前处理是否出现操作失误（主要目的是避免出现操作失误而我自己都不知道，因为我是不打算做平行样的）。前处理方法和LC-MS方法都会在前期通过加标回收来验证。-------------------------------看内标前处理损失程度的话不用内标跑标曲啥的哈，太浪费了，做三个添加内标的前处理后的样本，和两个前处理后基质添加内标的样本，去掉异常数据取均值比较即可得出前处理内标损失程度。
我会这么想的原因是上次问了一个做气质的老师，他说有些时候样品量大或者前处理麻烦的时候，不做平行样是可以理解的，但是一定要加替代物来做质控，如果那个替代物测出来的结果很低，那就说明这个样品抗生素也是有比较大的损失的，或者说这个结果不准确。我认为内标物在预处理前加入的话，也能起到替代物监控整个过程的作用。-------------------------------------------前处理时损失和样本平行勘察的不是同一个东西，对于内标法来说前处理即使损失50%，只要我的样品平行度在接受范围内也可以认为结果是可靠的，如果两平行样本相对偏差过大，样本检测结果一定是持疑的；另外样本数目大不是不做样本平行的里有哈，相反，样本量大更应该要做好平行