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蛋白质分离纯化

  • Ins_e020ef66
    2023/06/09
  • 私聊

前处理综合讨论

  • 各位大佬有使用“DEAE Sepharose fast 离子交换柱(1.6×30.0cm)”和 “Sephacryl S-200 HR 色谱柱(2.6×70.0cm)”做过蛋白纯化实验的吗?有没有操作视频呀,只是查文献看到这么个流程:
    将透析后的样品在4°C下以100000×g离心20分钟,并将上清液应用于DEAE Sepharose快流离子交换柱2.6×12.0 cm),该柱已用pH 7.450mM TrisHCl缓冲液平衡。在用相同的缓冲溶液以0.5mL/min洗涤柱并洗脱未吸附的物质后,用缓冲溶液中从0400mM的递增NaCl溶液从柱中以3.0mL级分洗脱蛋白质。收集钒浓度最高的级分,并在1.6×100 cm Sephacryl S-300GE HealthcareUppsalaSweden)中通过凝胶过滤进一步分级,用三个床体积的50mM TrisHCl缓冲液(pH 8.0)以1.3 mL/min洗脱。
    对这个实验完全没有概念,网上也没找到操作的视频,不知道需要准备哪些东西呀,无从下手,有做过的大佬吗,帮帮孩子吧,万分感谢!
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  • 歌名

    第1楼2023/06/10

    应助达人

    去B搜索一下层析,看看相关视频就知道了,不难

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  • Ins_e020ef66

    第2楼2023/06/10

    就是在B站没有搜到

    歌名(Ins_eedcdc41) 发表:去B搜索一下层析,看看相关视频就知道了,不难

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  • Ins_e020ef66

    第3楼2023/06/11

    我想请教一下,这个是需要自己装柱子,然后再上样洗脱吗?有没有装好的柱子可以直接买来用呢?

    歌名(Ins_eedcdc41) 发表:去B搜索一下层析,看看相关视频就知道了,不难

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  • 歌名

    第4楼2023/06/12

    应助达人

    大概率是要你自己买材料、装柱子,有AKTA的话就可以用现成柱子

    Ins_e020ef66(Ins_e020ef66) 发表: 我想请教一下,这个是需要自己装柱子,然后再上样洗脱吗?有没有装好的柱子可以直接买来用呢?

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